松材线虫体内细菌的分离与鉴定
【摘要】:松材线虫病是松属树种的一种毁灭性传染病害。近年有研究表明病原松材线虫与其携带细菌有着密切的联系,研究多集中于线虫体表的细菌,关于松材线虫体内细菌的研究未见报道。本实验以松材线虫AMA3、ZZ1和ZL1虫株为材料,对其体内细菌进行了初步研究。将松材线虫各虫株分别用不同浓度的H_2O_2、升汞以及抗菌素浸泡处理不同的时间,比较显示以1%升汞浸泡松材线虫虫体后再用抗菌素混合液处理能保证体表的细菌均被杀死。将通过此方法获得的3株松材线虫悬浮液接至NA平板检验,结果显示线虫体表均灭菌彻底,未长出菌落;将经体表灭菌处理过的各松材线虫研磨后涂布NA平板上长出若干菌落。分别挑取各单菌落纯化得到细菌NSB.1(AMA3)、NSBx.2(ZZ1)、NSBx.3(ZZ1)、NSBx.4(ZL1)和NSBx.5(ZL1)5个菌株,经生理生化特性测定,并与16SrDNA序列分析相结合,得出NSB.1、NSB.2与NSB.4这3个菌株均为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia);NSB.3菌株为水生雷弗森菌(Leifsonia aquatica);NSBx.5菌株为木糖氧化产碱菌木糖氧化亚种(Achromobacter xylosoxidans subsp.xylosoxidans)。从松材线虫体内细菌的分离情况来看,不同虫株分离获得的细菌种类有所不同,但嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)在松材线虫3个虫株体内均能分离到。关于这些细菌是否与松材线虫发育及其毒力有关尚待进一步研究。这是松材线虫体内存在细菌的首次报道。