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三叶斑潜蝇及近似种的PCR—RFLP快速鉴定方法

赵永旭  商晗武  黄特跃  周京花  崔旭红  李红亮  俞晓平  
【摘要】:【目的】通过对三叶斑潜蝇(Liriomyza trifolii Burgess)、美洲斑潜蝇(L.sativae Blanchard)及南美斑潜蝇(L.huidobrensis Blanchard)的COⅡ基因(线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅱ)进行酶切分析,实现三种近似种斑潜蝇的快速、准确鉴定。【方法】利用克隆、转化测序得到三种斑潜蝇的COⅡ序列,分别利用内切酶DraⅠ和SspⅠ进行酶切分析,并且进行不同虫态、性别、寄主及不同地理种群斑潜蝇的验证实验。【结果】两种内切酶酶切后的电泳图谱均可进行三种斑潜蝇的区分、鉴定;且幼虫、蛹的酶切图谱同成虫一致,不同地理种群、不同寄主、不同性别的同种斑潜蝇的酶切图谱一致。经DraⅠ酶切后:三叶斑潜蝇的COⅡ基因可被酶切为92bp,270bp,443bp三条带;美洲斑潜蝇COⅡ基因不能被酶切仅为一条805bp电泳条带;南美斑潜蝇COⅡ基因可被酶切为194bp,249bp,362bp三条带(图1)。经SspⅠ酶切后:三叶斑潜蝇COⅡ基因被酶切为79bp,326bp,400bp三条带;美洲斑潜蝇被酶切为79bp,726bp两条电泳带;南美斑潜蝇被酶切为400bp,405bp电泳条带(图2)。【结论】COⅡ基因作为一种理想的标记基因在昆虫鉴定中已得到广泛应用;通过对三种斑潜蝇的COⅡ基因分别进行DraⅠ和SspⅠ酶切分析,可进行三种近似种斑潜蝇的准确区分、鉴定;这种方法不受寄主、地理种群、虫体保存情况的影响,对不同虫态及不同性别的个体均适用,可在检疫、测报、防治等有关部门进行应用,实现对此三种近似种斑潜蝇的快速检测。

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