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构建一种基于Nano/ALISA技术的特异性检测伤寒沙门菌的免疫生物传感器

钟毓红  
【摘要】:目的 :结合纳米技术,利用适配体代替抗体,建立一种基于纳米/适配体联合免疫吸附法的新型沙门菌快速检测方法。方法 :对已有的适配体序列进行截短设计,将截短后的适配体通过碳化二亚胺法与磁性颗粒偶联,并选用间隔DNA封闭磁性颗粒的空余位点。修饰巯基的适配体通过金硫键与纳米金连接,羊抗鼠IgG则通过金硫键、静电力与纳米金粒子偶联,构建二抗-纳米金-报告基团偶联体,并用透射电子显微镜和原子力显微镜进行表征。该免疫生物传感器以Nano/ALISA技术作为一种新型的多级信号放大手段,反应体系中产生显色或荧光信号的蛋白质催化底物生成一定的颜色或荧光进行检测。结果 :成功获得具有结合伤寒沙门菌功能的适配体截短序列;成功构建一种基于Nano/ALISA技术的免疫生物传感器,并经透射电镜证实,其不需要特殊仪器,操作简便,检测时间短,仅需30 min;灵敏度较高,检出限为102 CFU/ml,线性范围为103~108CFU/ml;稳定性高,对103 CFU/ml菌液检测的相对标准偏差为4.09%;特异性强,与鼠伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、宋内志贺菌、福氏志贺菌等无交叉反应。该免疫生物传感器应用于实际临床标本的检测,阳性预测值与阴性预测值分别为100%,98.3%,能满足临床标本的初筛作用。结论 :本研究成功制备纳米金偶联体,构建基于Nano/ALISA技术的特异性检测伤寒沙门菌的免疫生物传感器。该技术成本低廉、操作简单、灵敏度高、特异性强,这一首次提出以适配体、病原菌和纳米金构成三明治结构用于特异性检测病原菌的新型免疫学方法,为病原菌的检测提供了一种新的思路。

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