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线粒体内膜蛋白HADHA对肝细胞脂肪变性及氧化应激的影响

丁洁霞  李檬  万星勇  金希  陈韶华  虞朝辉  厉有名  
【摘要】:目的探讨线粒体内膜蛋白HADHA在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的表达及其对肝细胞脂肪变性及氧化应激的影响。方法采用1mM游离脂肪酸(FFA)诱导L02细胞(正常人肝脏细胞)24h、48h、72h,用GPO Trinder酶学方法测定细胞甘油三酯含量、油红O染色观察细胞脂变程度变化,采用实时定量PCR(q-PCR)法及Western Blot法测定各时间点HADHA的表达变化。随后采用HADHA SiRNA转染L02细胞抑制HADHA的表达,再以1mM FFA诱导L02细胞脂变48h,用GPO Tinder酶学方法测定细胞甘油三酯含量,运用q-PCR法观察HADHA表达抑制后脂变相关基因PPARα、PPARγ、CPT2、ECHS1、EHHADH、HADH、HADHB等的表达变化,采用流式细胞技术测定线粒体膜电位(MMP)水平变化,进一步测定ATP、过氧化氢(H2O2)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)等氧化应激指标变化。结果 1mM FFA诱导L02细胞24h、48h、72h后,细胞TG含量随着FFA诱导时间的增加而逐渐增高。通过油红O染色,脂变组L02细胞质中脂滴沉积显著增加,HADHA的表达水平升高,其中高脂诱导48hHADHA升高最显著。采用HADHA SiRNA抑制脂变的L02细胞的HADHA的表达后,细胞TG含量显著上升,细胞的脂变程度加重,脂变相关基因PPARα、PPARγ、CPT2、ECHS1、EHHADH、HADH、HADHB的基因表达水平下调,提示HADHA对细胞脂变方面起保护作用。但是,在干扰HADHA组ATP含量上升,MDA含量下降,H2O2含量减少,CAT水平上升,MMP水平上升,提示氧化应激状态得到显著改善。结论 HADHA对细胞脂肪变性起一定的保护作用,抑制HADHA的表达显著减少氧化应激的程度。

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