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脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及机制的研究

龚建明  黄引平  汤彪  陈金霞  周洁  黄艳君  
【摘要】:目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制。方法细胞实验分为6组:对照组,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10μg/mlLPS作用24 h,干预组:10μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h,LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24h,拮抗组:10μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h,BOC-2组:10μg/ml LPS+100μmol/L BOC-2作用24h。采用酶联免疫吸附试验方法检测了正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7二氢二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)mRNA的表达;Western blot分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性。结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89)pg/L,与正常孕妇(545.67±30.91)pg/L相比明显下降(P0.01)。(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P0.01),DCF密度值从(53±3.08)上升至(77±5.83,P0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(P0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(P0.01)。(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从(77±5.83)降至(62±3.39,P0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(P0.01),SOD蛋白表达也有所升高(P0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53)U/ml(P0.01)。(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41)U/ml(P0.01),但仍高于LPS组(P0.01);BOC-2组SOD含量为(4.9±0.32)U/ml与LPS组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)和Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用。

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