甲副伤寒OmpA-SpaO融合双抗原原核表达产物免疫保护性研究

【摘要】：目的确定甲型副伤寒朴菌OmpA-SpaO融合双抗原原核表达产物rOmpA-SpaO免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA、SpaO基冈携带率。方法采用柔性肽序列连接ompA与spaO基因,构建ompA-spaO人工融合基因及其融合抗原rOmpA-SpaO高效原核表达系统,采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western Blot鉴定rOmpA-SpaO抗原性和免疫反应性。采用PCR检测196株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA、SpaO基凶携带率。采用甲副伤寒杆菌小鼠感染模型,了解rOmpA-SpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用。结果 0.1 mmol/L IPTG能高效诱导表达rOmpA-SpaO。rOmpA-SpaO免疫家兔可产生抗体,并能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性western杂交信号。91.4%～94.9%甲型副伤寒杆菌临床菌株含有SpaO、ompA基因。100μg和200μg rOmpA-SpaO对感染小鼠的免疫保护率分别为66.7%(8/12)和83.3%(10/12)。rOmpA-SpaO免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1:5～1:40。结论 ompA、SpaO基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛。rOmpA-SpaO有良好的免疫原性和免疫保护作用,比单一rOmpA或rSpaO基冈蛋白抗原免疫保护作用更强,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。