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TLR4在汉滩病毒感染的EVC304细胞中的信号转导通路研究

于海涛  王平忠  姜泓  南雪平  张野  李彧  王伟  蒋伟  杨栋强  苏雯静  白雪帆  
【摘要】:目的观察汉滩病毒76-118株感染EVC304细胞前后,细胞因子IFN-β、IL-6和TNF-α的分泌变化及TLR4在介导其分泌过程中的作用和信号转导通路。方法 TLR4-和TLR4+EVC304细胞分别被汉滩病毒感染,以此作为实验组。以LPS刺激作为阳性对照组,无任何处理作为阴性对照组。48小时后,ELISA方法用来检测细胞培养上清中IFN-β、IL-6和TNF-α的浓度。随后,用Real-time PCR和Western blot的方法来检测TLR4信号转导通路中MyD88和TRIF在mRNA和蛋白质水平的表达变化,以及用IFA的方法来检测转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况。结果汉滩病毒感染EVC304细胞后,在TLR4+EVC304细胞的培养液上清中,IFN-β、IL-6和TNF-α的浓度明显升高,而在TLR4-EVC304细胞的培养液上清中,其浓度没有明显变化。汉滩病毒感染后,TLR4+EVC304细胞中TRIF的mRNA水平的表达较TLR4-EVC-304细胞有显著升高,MyD88的mRNA水平的表达则没有明显变化。Western blot分析结果与之相似。同时IFA结果显示在汉滩病毒刺激6小时以后,TLR4+EVC304细胞中转录因子NF-κB和IRF-3发生明显细胞核移位,而TLR4-EVC-304细胞则未发现有明显的细胞核移位。结论汉滩病毒感染EVC304细胞可引起细胞因子IFN-β、IL-6和TNF-α的分泌增加。血管内皮细胞膜表面分子TLR4可能介导了这些细胞因子的分泌且MyD88非依赖途径可能是介导汉滩病毒感染的EVC304细胞中TLR4信号转导的主要途径。

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