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P21在肝癌化疗中对表阿霉素的增敏性及其作用机制

熊娟  徐笑红  陈文虎  
【摘要】:目的通过构建真核表达载体pEGFP-C2-p21,研究其在肝癌化疗中对表阿霉素的增敏作用及作用机制。方法(1)构建包含目的基因p21的重组质粒pEGFP-C2-p21,利用脂质体介导pEGFP-C2-p21及pEGFP-C2对照质粒转染肝癌HepG2细胞,并用G418筛选阳性细胞克隆。实时PCR定量检测p21mRNA的表达,Hoechst33342法、流式细胞术分析转染后细胞凋亡及细胞周期的变化。(2)联合0.2μg/mL的表阿霉素浓度处理肝癌HepG2细胞,MTT法检测联合抑制率,实时PCR观察癌基因survivin mRNA的水平变化。结果(1)转染后经鉴定其有p21 mRNA表达量的增高,是空白对照组的155倍(P0.05);(2)p21转染后,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期(F=31.59,P0.01);但对凋亡率改变不显著(P0.05)。(3)表阿霉素与p21转染合用时,p21可促进表阿霉素对HepG2细胞的杀伤作用,且1~4天内随作用时间的增加,抑制效应增强(r=0.91,P0.05),该效应在3~4 d时较明显(Q=1.07)。(4)荧光定量PCR显示,联合组Survivin mRNA水平显著低于p21转染组;与单独加药组比较,联合作用仅在48 h时差异有统计学意义(P0.01)。结论P21能增强HepG2细胞对表阿霉素的敏感性,其作用可能是通过使细胞周期发生G_0/G_1期阻滞及下调survivin的表达来实现的。

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