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华蟾素对人膀胱癌T24细胞体外作用及其机制的实验研究

肖家全  程文宁  任黎刚  陶厚权  
【摘要】:目的研究华蟾素在体外对人膀胱癌T24细胞增殖的影响,细胞凋亡的诱导作用以及细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能作用机制。方法实验分三部分。第一部分用MTT法观察不同浓度的华蟾素作用不同时间(24h、48h、72h)后对T24细胞增殖的影响。第二部分采用光学显微镜及荧光染色形态学观察经华蟾素作用后T24细胞产生的凋亡形态学改变,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。第三部分应用划痕愈合实验检测华蟾素对T24细胞迁移能力的影响。结果1、MTT实验显示华蟾素能显著抑制T24细胞的增殖,并随药物浓度升高和作用时间的延长而抑制作用增强,呈明显浓度和时间依赖性。华蟾素作用24h后,T24细胞增殖抑制范围为4.83%-40.34%,而在48h、72h后的抑制率分别为5.65%-59.29%和7.29%-87.19%。2、光学显微镜下显示不同浓度华蟾素作用于T24细胞4小时后,细胞密度呈剂量时间依赖性降低,同时可观察到部分凋亡细胞所具有的典型形态学改变。流式细胞仪检测不同浓度的华蟾素作用于T24细胞24h后凋亡细胞所占比率分别为3.2%、9.91%、16.0%、21.1%和26.3%,和羟基喜树碱对照组(17.2%)相比,细胞凋亡率呈明显浓度依赖性增高,差异具有显著性。不同浓度华蟾素作用T24细胞24h后,S期细胞逐渐增多,表明华蟾素可将T24细胞周期阻断于S期,使之不能进入G2/M期,并且呈剂量依赖性。3、划痕实验表明华蟾素作用24h后,T24细胞的迁移能力逐渐降低,呈显著的浓度依赖性。结论1、华蟾素能显著抑制T24细胞增殖,其抑制作用呈时间和剂量依赖性。2、华蟾素能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈剂量时间依赖性。T24细胞周期阻断于S期,不能进入G2/M期,并且呈剂量依赖性,这可能是华蟾素抗T24细胞增殖的机制之一。3、华蟾素能显著降低T24细胞的迁移能力。4、华蟾素具有治疗非肌层浸润性膀胱肿瘤和预防膀胱肿瘤复发的可能。

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