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左旋咪唑与咪唑啉2受体的放射性受体配基实验观察

李佳  郑荣远  夏念格  殷为勇  钱掩映  王新施  陈艳艳  
【摘要】:目的:探讨咪唑啉2受体(12R)是否参与了盐酸左旋咪唑(LMS)诱发炎性脱髓鞘白质脑病的病理过程。方法:(1)正常大鼠脑组织I2R竞争结合试验:用[~3H]2-BFI标记I2R,通过测定其平衡解离常数(Ki)观察LMS对2-BFI能否起竞争作用,即测定LMS与I2R在体外结合能力;(2)LMS长期处理大鼠脑组织I2R饱和结合实验:将大鼠分为2组各6只,一组为LMS处理组,予连续腹腔注射LMS14天;一组为NS对照组,予连续腹腔注射NS14天。后以饱和结合试验测定两组大鼠脑组织I2R受体密度(Bmax)和亲和力(Kd)的变化:(3)LMS-CFA致敏并长期LMS处理及EAE大鼠的脑组织I2R饱和结合实验:将大鼠分为3组各6只大鼠。EAE组通过豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)-CFA致敏大鼠,长期腹腔注射NS,发病高峰期处死;LMS致敏组通过LMS-CFA致敏大鼠,连续腹腔注射LMS19天;CFA对照组大鼠通过NS-CFA致敏大鼠,连续腹腔注射NS 19天。后进行饱和结合试验,检测其Kd和Bmax值的变化。结果:(1)LMS能抑制[~3H]-2BFI与大鼠脑组织I2R受体的结合,且该抑制具有浓度依赖性。Ki值为9.796×10-6M;(2)LMS处理组I2R的Kd和Bmax值分别是7.274±1.929nM和432.7±71.76fmol/mg蛋白;NS对照组I2R的Kd和Bmax值分别是6.262±1.696nM和194.7.0±31.53fmol/mg蛋白。LMS处理大鼠脑组织的I2R受体密度明显上调(n=6,P0.05),亲和力两组相比无统计学差异。(3)CFA对照组I2R的Kd和Bmax值为3.367±0.94nM和162±22.19fmol/mg蛋白。EAE组I2R的的Kd和Bmax值为5.416±1.153nM和263.0±31.99fmol/mg蛋白,与CFA对照组相比,其受体密度明显上调(n=6,P0.05),亲和力明显下降(n=6,P0.01)。LMS处理组I2R的Kd和Bmax值分别是4.916±0.91 nM和456.6±46.69fmol/mg蛋白,与CFA对照组相比,其受体密度明显上调(n=6,P0.01),亲和力明显下降(n=6,P0.05)。结论:体外实验证明:左旋咪唑在体外能与I2R直接结合。体内实验证明:1、左旋咪唑长期作用下能引起I2R密度上调。2、EAE大鼠脑内I2R受体密度上升,亲和力降低。3、予LMS-CFA抗原直接致敏,并长期LMS.处理的大鼠脑内I2R密度上升,亲和力降低。提示左旋咪唑促发EAE的作用,可能是通过I2R的结合起调节作用的。

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