收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

重组EGF-IL-18融合蛋白的表达优化与分离纯化

赵峰  彭颖  吕建新  王震  赖飞  
【摘要】:目的:构建 EGF-IL-18融合蛋白的原核表达系统,优化表达 EGF-IL-18 融合蛋白,分离纯化有活性的 EGF-IL-18。方法:将人 EGF-IL-18融合蛋白基因克隆到 pET12a(+)和 pET26b(+)载体上;通过优化诱导时间、诱导温度、及其诱导剂 IPTG 的浓度,提高 EGF-IL-18融合蛋白的表达量。超声破碎菌体, 用高浓度蛋白变性剂溶解包涵体;采用离子交换层析与凝胶过滤层析对融合蛋白进行分离纯化。结果:成功构建了 pET12a-EGFIL-18和 pET26b-EGF-IL-18 两株工程菌,其表达的目的蛋白以包涵体形式存在,改变诱导条件显示表达条件对产物的分布影响显著,最终确定在以起始菌体浓度 OD_(600)值为0.02, 35℃,200Rpm 振荡培养4h 后,加诱导剂(IPTG)为0.2mM,28℃,200rpm 振荡培养16h 能得到较佳的蛋白表达量、表达稳定性及其工程菌的遗传稳定性, 产物电泳分析表明 EGF-IL-18融合蛋白占总蛋白50%以上,通过联合应用离子交换层析与凝胶过滤层析的方法进行纯化,EGF-IL-18融合蛋白纯度可达 90%以上。结论:成功构建了 pET12a-EGFIL-18和 pET26b-EGF-IL-18两株工程菌,通过条件优化得到较高表达量的 EGF-IL-18融合蛋白,应用离子交换层析与凝胶过滤层析的方法的联用得到较高纯度的 EGF-IL-18融合蛋白。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王雁南;王菊芳;陈保生;周佳海;王小宁;;人载脂蛋白AV的克隆、表达及初步纯化[J];现代食品科技;2011年08期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 赵峰;彭颖;吕建新;王震;赖飞;;重组EGF-IL-18融合蛋白的表达优化与分离纯化[A];浙江省免疫学会第六次学术研讨会论文汇编[C];2007年
2 曹丹燕;刘欣;许琳;严明;;酿酒酵母醛糖还原酶的表达条件优化及纯化[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
3 陈敏;高虹;梁新乐;;云芝漆酶基因在毕赤酵母中的表达研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
4 陈敏;高虹;梁新乐;;云芝漆酶基因在毕赤酵母中的表达研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
5 潘建华;彭颖;郑昭暻;吕建新;;重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年
6 赵平森;姜宁;张爱忠;;家蝇抗菌肽Cec Md的高效表达、纯化及其活性的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 张鹏;郝林琳;王佳;于浩;刘松财;;人干扰素α-2b原核表达诱导条件的优化[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 王秀青;六种天蚕素类基因工程抗菌肽的研制及应用[D];南京农业大学;2007年
2 魏洪涛;人β_2防御素的重组表达、纯化与活性分析及其mRNA在牙龈上皮的表达[D];吉林大学;2006年
3 彭力;重组人β-防御素的表达策略研究[D];浙江大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王江;重组钩端螺旋体三联体抗原蛋白原核表达条件的优化和高密度发酵[D];浙江大学;2008年
2 吴迪;透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的大肠杆菌融合表达载体的构建与表达分析[D];西北农林科技大学;2005年
3 陈川;PTD-Trim5α和PTD-Trim5αH(R328-332)在大肠杆菌中的表达优化及其作用机制研究[D];暨南大学;2010年
4 赵平森;家蝇抗菌肽Cec Md在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其活性的研究[D];黑龙江八一农垦大学;2009年
5 江荣香;卤醇脱卤酶HheA表达优化及定向进化[D];电子科技大学;2012年
6 唐蓓;胸腺基质淋巴细胞生成素基因的克隆与表达[D];华中师范大学;2009年
7 张鹏程;微杆菌Microbacterium sp.ZZJ4-1尿酸氧化酶基因的克隆表达及重组酶性质的研究[D];浙江大学;2012年
8 谢捷;v-Src蛋白酪氨酸激酶的表达优化及活性的初步研究[D];浙江大学;2004年
9 范恩宇;短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达[D];浙江大学;2010年
10 周玉珍;猪小肠抗菌肽CecropinP1在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性研究[D];南京农业大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978