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膜分子RCAS1在诱导免疫细胞凋亡的作用

洪学军  王青青  曹雪涛  
【摘要】:目的研究 RCAS1分子对免疫细胞的凋亡诱导作用以及生长抑制作用,对相关细胞的 RCAS1受体进行检测,分析 RCAS1诱导细胞凋亡的可能机制。方法1、细胞凋亡检测。利用密度梯度离心法分离新鲜外周血单个核细胞,培养和分选 T 淋巴细胞,同时利用 Jurkat、K562、THP1和 E003细胞等作为研究对象,用 GST-RCAS1和 Ad-RCSA1处理后进行 Annexin V 和 PI 染色,用 FACS 方法检测凋亡细胞的比例。2、细胞表面的 putative RCAS1受体的检测。用 GST-RCAS1融合蛋白同上述细胞孵育后,加入 GST 单抗,再加入 FITC 标记的抗 IgG 二抗,用 FACS 检测荧光阳性细胞的比例。3、生长抑制试验。用 MTT 实验检测 RCAS1对 Jurkat、 K562细胞生长的抑制作用。结果 1、激活的 T 细胞在用 GST-RCAS1融合蛋白和 Ad-RCAS1处理后均能检出细胞凋亡,而且经 Ad-RCAS1处理后的细胞凋亡更为显著。在 Jurkat、K562、THP1和 E003等细胞,病毒实验组均检出细胞凋亡, 而蛋白实验组在部分细胞能检出细胞凋亡。2、在受体检测实验中,K562细胞表达 RCAS1受体,而未处理的 Jurkat 细胞不能检出,但是用 PHA 活化 Jurkat 细胞后,其受体阳性细胞率高达43%。3、用 MTT 法检测 RCAS1对 Jurkat、K562的细胞生长抑制作用时,蛋白实验组未检测明显的抑制作用,病毒实验组在 MOI 为 12.5~100的范围内对 Jurkat、K562均有抑制作用。结论 1、RCAS1能与其 putative 受体结合而诱导激活的 T 细胞及 K562、Jurkat 等免疫细胞来源的细胞系发生凋亡。2、RCAS1受体是一种能被诱导表达的受体。3、RCAS1对 Jurkat、 K562的细胞生长有一定的抑制作用。

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