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LMS对EAE大鼠中枢神经系统MCP-1、MIP-1α、MMP-2及ICAM-1表达的影响

卢晔芬  邱伟文  吴赛珍  郑荣远  
【摘要】:目的:了解左旋咪唑(LMS)不同阶段给药对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠中枢神经系统(CNS)MCP-1、MIP-1α、MMP-2及 ICAM-1表达的影响,为阐述 LMS 性白质脑病的发病机制提供实验依据。方法:雌性 Wistar 大鼠45只分成5组:CFA 对照组、模型(EAE) 组、LMS 免疫前给药组(LMS1)、LMS 免疫同时给药组(LMS2)、LMS 免疫后间断给药组(LMS3)。足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆-完全弗氏佐剂(GPSCH-CFA)免疫大鼠建立 EAE 模型,LMS1于免疫前给 LMS(10mg/kg,ip,bid×7d),LMS2于免疫第0h、24h、48h 给 LMS(10mg/kg,ip,qd×3d), LMS3于免疫后每隔11天分别给 LMS 溶液(10mg/kg,ip,qd×3d),共计6次。观察并记录动物行为学及体重的变化。各组动物于发病高峰期处死,取脑和脊髓,行 HE 染色和 KluverBarrera 髓鞘染色:免疫组化法及原位杂交法分别测定表达 GFAP、MCP-1、MIP-1α的细胞数量和表达 MCP-1、 MMP-2、ICAM-1 mRNA 的细胞数量。结果:(1)行为学观察:EAE 组大鼠最早发病于免疫后第 13天,潜伏期为13.67±1.15dpi。LMS1、LMS2组潜伏期分别为14.40±2.07dpi 和14.00±1.19dpi(与 EAE 组比较,P0.05)。14dpi 时,LMS1、LMS2组的症状评分平均值(2.50±0.71,2.00±0.00)明显增高(P0.01,P0.05)。LMS1组最大症状评分平均值(3.80±0.45)增高(P0.05)。LMS2组的发病率(8/9)较 EAE 组(3/8)增高(P0.05)。LMS3组大鼠发病于14.00±1.37dpi,且2/10大鼠于 24.00±1.41dpi 复发。(2)病理学改变:EAE 组 CNS 内见不同程度的炎性细胞浸润和噬神经现象; KluverBarrera 髓鞘染色发现,广泛的神经髓鞘变性、脱失,以脑干、脊髓和小脑等为著。LMS1 及 LMS2组大鼠 CNS 炎性浸润和脱髓鞘呈加重趋势。LMS3组复发期出现炎症浸润及脱髓鞘改变。 (3)免疫组化结果:在发病高峰期,与 CFA 组相比,EAE 组大鼠 CNS 内 GFAP、MCP-1及 MIP-1α表达量明显增加(P0.01):与 EAE 组相比,LMS1及 LMS2组大鼠 CNS 内 GFAP 明显增加(P0.01), LMS1组大鼠脑干 MIP-1α明显升高(P0.01),LMS1及 LMS2组大鼠腰髓 MIP-1α升高(P0.05)。于复发期,LMS3组可见 GFAP、MCP-1及 MIP-1α表达量增加(P0.01)。(4)原位杂交结果: 在发病高峰期,与 CFA 组比较,EAE 组大鼠 CNS 内表达 MCP-1、MMP-2、ICAM-1mRNA 阳性细胞数目增加,且以大脑皮层及脑干表达明显:与 EAE 组比较,LMS1、LMS2组大鼠大脑内表达 MCP-1、 MMP-2、ICAM-1mRNA 阳性细胞染色数目增加(P0.01)。与 EAE 组比较,LMS3组于复发期可见表达 MCP-1、MMP-2、ICAM-1mRNA 阳性细胞数目增加。结论:(1)LMS 免疫前给药能加重 Wistar 大鼠 EAE 症状。LMS 免疫同时给药能增加 Wistar 大鼠 EAE 的发病率,加重症状。LMS 免疫后阶段给药能促使 EAE 复发。LMS 不同阶段给药均能加重炎症浸润及髓鞘脱失。(2)LMS 在促发 EAE 的病程中激活了星形胶质细胞。(3)LMS 可能通过 MCP-1、MIP-1α、MMP-2及 ICAM-1影响 T 淋巴细胞穿透 BBB 而促发 EAE。

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