小鼠胚胎干细胞系的建立及影响因素探讨

【摘要】：目的:探讨昆明小鼠胚胎干细胞分离的几种影响因素,对其特性作初步鉴定。方法:对比两种囊胚获取方法、两组培养液、两种分离内细胞团的方法,对部分内细胞团进行评分.稳定传代的一株胚胎干细胞进行全能性鉴定。结果:超捧卵组和自然受孕组的内细胞团形成率(64.9%, 74.54%)和原代胚胎干细胞克隆形成率(10.09%,14.54%)两组相似,差异均无显著性(P0.05)。囊胚培养液组24h 囊胚孵出率明显高于 DMEM 培养液组(62.5%vs17.14%,P0.01);内细胞团形成率稍低(69.32%,74.29%),但差异无显著性(P0.05);原代克隆形成率明显偏低(35.2%vs.15.9%, P0.01)。免疫外科法获1株传10代以上的胚胎干细胞系,而全胚培养法最高传7代。直径大小70～ 100μm、周边规则、隆起明显的内细胞团,克隆传代持久.结论:高糖 DMEM 培养液、免疫外科法对克隆的分离和传代有利.对内细胞团进行评分有助于确定挑选克隆传代的时机,评分高者具较好的传代能力.研究建立的鼠胚胎干细胞系经 AKP 染色、细胞免疫荧光法、RT-PCR、体内外分化实验、核型分析等方法鉴定具有胚胎干细胞特性。