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用基因芯片进行单卵裂球HLA-DRB分型

徐炳森  黄学锋  周颖  
【摘要】:目的:基因芯片,实现人类胚胎的单个卵裂球细胞 HLA-DRB 位点基因分型,通过与常规的序列特异引物(SSP)法分型结果进行比较以检验基因芯片分型结果的准确性和优越性.方法(1) 家系选择:2004年11月份温州医学院附属第一医院生殖医学中心行 IVF 治疗并同意将多余胚胎捐献给医学研究的夫妇共2对;(2)单卵裂球两轮巢式 PCR 扩增:卵裂球经裂解后直接进行第一轮扩增,引物序列为正向:5’-CTCGCCGCTGCACTGTGAAGCTCTC-3’反向:5’-CCTTCG GTCCCCACA GCACGTTTC-3’;然后取扩增产物1μL,用上述引物进行第二轮扩增.(3)芯片分型:借鉴外周血 HLA-DRB 位点基因芯片分型的方法对单细胞 HLA-DRB 位点两轮 PCR 扩增的产物进行分型,首先通过扩增使产物带上 Cy-3荧光标记,然后与包含人类 HLA-DRB 等位基因探针的基因芯片杂交,通过扫描杂交结果,可以读出该单卵裂球的 HLA-DRB 等位基因型。(4)单卵裂球 HLA-RB 位点序列特异引物法分型:取5~μL单卵裂球第一轮扩增产物,用 Biotest HLA-DRB SSP 分型试剂盒进行分型,通过分型电泳图谱可以直接读出该卵裂球的 HLA-DRB 位点的等位基因型。

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