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一个新的家蚕基因的克隆及其原核表达研究

王运华  张耀洲  
【摘要】:我们从家蚕蛹期cDNA文库中获得了一条长870bp的开放阅读框序列(ORF),其GENE BANK 登录号为:DN237560。该基因编码289个氨基酸,预测分子量为33.27KDa。NCBI BLAST比对表明,该序列与其他真核生物的相似性极低,基本没有保守结构域,说明此序列很可能为一条未知功能的新基因。我们用PCR方法将此序列完整的ORF进行了扩增,并在首尾分别引入EcoRⅠ/XhoⅠ两个酶切位点,经双酶切后,插入到融合表达载体pET-28a的相应酶切位点,构建重组融合蛋白表达质粒,并转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经PCR、酶切鉴定,证实重组正确。用IPTG进行诱导表达,经SDS- PAGE检测分析,在36 kDa处有一浓集特异性蛋白条带,与预期值相符,表明该序列在大肠杆菌中得到了表达。用超声波裂解菌体后分离上清与沉淀,经SDS-PAGE检测分析,发现此融合蛋白主要存在于上清中。

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