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汉坦病毒G2糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其应用

梁伟峰  朱国献  朱函坪  姚苹苹  朱智勇  
【摘要】:目的构建汉坦病毒Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体并在昆虫细胞中表达及在免疫荧光诊断中的应用。方法以质粒pUCm-Z10M为模板设计上下引物,PCR扩增Z10 株G2基因片断,将G2片断克隆入pUCm-T质粒载体,碱法提取质粒pUCm-Z10-G2,酶切后将回收片断插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa,构建重组体pFastBacHTa-Z10-G2,重组体转化感受态细胞E.coli DH10Bac,经2轮筛选,提取重组质粒转染昆虫细胞sf9并用IFA检测表达的G2蛋白。结果获得含有编码汉坦病毒的Z10株的包膜糖蛋白G2基因的重组质粒,转染昆虫细胞表达出G2蛋白,与阳性肾综合征出血热血清反应,昆虫细胞内呈现特异性环状荧光。检测40份肾综合征出血热血清与全病毒细胞抗原片的符合率为95%。结论成功构建汉坦病毒Z10株包膜糖蛋白G2基因的表达载体,并在昆虫细胞中表达。可利用重组G2蛋白检测汉坦病毒感染。

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