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高血压病血瘀证患者血清致伤HUVEC的差异蛋白质组学研究

孙喜稳  陈利国  王华强  屈援  颜亮  唐海兰  李晴  
【摘要】:目的:对高血压病血瘀证患者血清致伤的人脐静脉内皮细胞进行差异蛋白质组学进行研究,筛选高血压病血瘀证相关的标志蛋白。方法:选择高血压病患者150例,其中血瘀证组33例;非血瘀证组117例;另选择健康者30名作为对照。分别以含有10%患者血清和正常人血清的培养基培养正常的huvec24h,提取蛋白后采用双向凝胶电泳法(SDS-PAGE)分离蛋白,选取3次重复实验中共有的、表达量升高或降低3倍以上的蛋白质点进行质谱鉴定。Protein Chip PBS1j-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白质质谱(基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS)。所有蛋白质质谱使用GPS Explore3.6软件进行分析后,用MASCOT2.1搜库软件对本地数据库进行检索,鉴定蛋白质。结果:高血压病血瘀证组与健康组之间共检测出差异有统计学意义的蛋白质点7个(P0.05),分别是真核起始因子5A(eIF5A)、多肽脯氨酸顺反异构酶(PPIA)、真核起始因子4A(eIF4A)、真核起始因子4A3(eIF4A3)、剪切因子(SRp40)、核孔蛋白(Nup54)、谷氨酸脱氢酶(GDH);高血压病血瘀证组与高血压病非血瘀证组之间共检测出差异有统计学意义蛋白质点11个(P0.05),分别是膜联蛋白A5(AnnexinA5)、钙周期蛋白(S100A6)、内质网蛋白(ERp29)、OTUB1(OTU Domain-containingubiquitin aldehyde-binding protein 1)、G蛋白β亚单位2样1蛋白(GBLP)、蛋白酶体(proteasome)、核纤层蛋白(LMNA)、远端上游绝缘件结合蛋白1(FUBP1)、GMP合酶、热休克蛋白(HSP70)、乌头酸酶(Aconitase);高血压病非血瘀证组与健康组之间共检测出差异有统计学意义的蛋白质点1个(P0.05),是EHD1(EH domain-containing protein)。结论:AnnexinA5、S100A6、ERp29、OTUB1、GNB2L1、proteasome、LMNA、FUBP1、GMPS、HSP70、Aconitase等是高血压病血瘀证的标志蛋白,它们是高血压病血瘀证的物质基础,为进一步建立高效、敏感、稳定表达的单克隆细胞模型,并为最终的应用奠定了工作基础。

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