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PNPLA3 I148M肝脏特异表达质粒构建

辛永宁  姜曼  林中华  张丁丁  耿宁  宣世英  
【摘要】:正目的构建PNPLA3 I148M肝脏特异表达质粒,并在细胞水平进行表达验证。方法根据NCBI上PNPLA3的已知序列,全基因合成PNPLA3基因的cDNA片段。利用PNPLA3的cDNA片段为模板,通过两轮PCR的点突变,构建出PNPLA3 I148M突变体,连接至表达载体,经转化、各挑选2个克隆、菌液培养和质粒抽提多步后,进行酶切验证,同时以野生型PNPLA3为阳性对照。提取C2C12细胞的基因组DNA,以其为模板,进行PCR扩增获取肝脏特异性表达启动子ALB,经PCR扩增将Enhancer-pro-

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