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自噬抑制剂CBI对新生期惊厥所致远期脑损伤的干预及分子机制

孙奇  陈情情  田甜  倪宏  
【摘要】:目的探讨自噬抑制剂(Cathepsin B Inhibitor,CBI)对三氟乙醚所致新生期反复惊厥大鼠远期神经行为和海马苔藓纤维再生性发芽的影响及分子机制。方法 88只生后6d的健康SD大鼠随机分为四组(n=22/组):正常对照组、CBI空白对照组、惊厥组及CBI组。通过三氟乙醚反复吸入建立新生期大鼠反复惊厥动物模型:惊厥组(RS组)每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30min,连续9d;正常对照组(CONT组)与RS组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组于惊厥前腹腔注射CBI(2μl,0.5g·L-1),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作,操作同RS组;CBI空白对照组(用CCBI组表示),与CBI组同样操作但不吸入三氟乙醚。于生后不同时间段观察发育、认知及情感指标。于生后35d采用Timm染色法检测海马苔藓纤维发芽,采用免疫印迹技术检测锌转运体3(Zn~(2+)transporter 3,ZnT3)和载脂蛋白E(ApoE)的表达。结果 1、行为学结果:(1)旷场实验:RS组和CBI组水平运动次数少于CONT组(P0.05),RS组垂直运动少于CONT组,有显著差异。(2)(3)Morris水迷宫检测:1第5d RS组逃避潜伏期明显长于对照组,第2d,5d CBI组明显短于RS组;2RS组搜寻策略较CONT组和CBI组表现较差。2、Timm染色:RS组CA3区和齿状回苔藓纤维发芽程度明显高于CONT组和CBI组。3、免疫印迹法显示:(1)RS组在P35海马和皮质中ZnT3的表达明显高于CONT组和CBI组,CBI组与CONT组相比无明显差异。(2)RS组在P35海马和皮质中ApoE蛋白的表达明显高于CONT组和CBI组。结论 1、惊厥发作前应用CBI进行干预,能改善惊厥所致生长发育、情感认知等神经行为损伤。2、惊厥发作前应用CBI进行干预,明显抑制反复惊厥所致海马齿状回及CA3区苔藓纤维发芽程度,并可下调远期海马及大脑皮层ZnT3和ApoE蛋白的表达。4、本研究表明,CBI可通过ZnT3/ApoE途径对新生期惊厥性脑损伤发挥神经保护作用。

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