磁珠法快速提取乙型肝炎病毒DNA的研究及其在诊断试剂中的应用

【摘要】：目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度的血液病毒核酸的提取方法。使之在充分保留了现有煮沸法便捷特性的情况下,增强其抗干扰性能力,为核酸定量检测的全自动化提供有效支撑。方法以乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的提取为例,研制出一套快速的、适用于临床诊断的磁珠抽提方法。通过平行检测100例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、灵敏度、特异性、精密度等方面与已在临床广泛应用的、成熟的煮沸法进行相关性分析;并用肝素钠、乳糜、EDTA对两种方法进行抑制物干扰实验和线性分析。结果磁珠法在精密度、灵敏度、特异性等方面都优于煮沸法,但两种方法在常规标本的检测中无显著的差异;在抑制物方面,当肝素钠浓度达到62.5U/ml后,对煮沸法提取的高低浓度的HBV-DNA阳性样本有明显的抑制作用,而磁珠法并不显著;血脂对两种方法提取的HBV-DNA含量干扰不明显,EDTA对高浓度的阳性标本有很明显的抑制作用。结论采用以磁珠法为基础的核酸提取方法 ,核酸得率高,具有较宽的检测范围和定量准确性,操作简单,可做为实验室首选的核酸提取方法 ,并可应用于临床诊断。