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新的TPR蛋白TPR99和热休克蛋白70在ARPE-19细胞中的相互作用

刘庆淮  高娟玉  王珍  蔡建园  
【摘要】:正目的通过分析ARPE-19细胞中的蛋白TPR99和热休克蛋白70以及其突变体的体外结合,探讨TPR99和热休克蛋白70的相互作用,及其相互作用位点。方法通过RT-PCR,在ARPE-19的cDNA中扩出TPR99和Hsp70的基因,PCR检测TPR99在体内多种组织中的表达。通过酵母双杂交和GST- pull down,检测其能否相互作用,并且构建Hsp70的突变体ΔGPTIEEVD,ZXEEVD,mhsp70(EEVA),mksp70(AEVD)。PTIEEVD,通过其相互作用的情况,确定其作用位点。结果TPR99的多组织表达显示其在体内多种组织中表达。且在增生性肿瘤组织中高表达。酵母双杂交和GST-PULL down结果显示,TPR99和热休克蛋白70能够相互作用,HspT0基因突变后酵母双杂交结果显示,TPR99和Hsp70的C-末端相互作用。结论TPR99和Hsp70相互作用可能与促进RPE细胞增殖性疾病的发生发展有关。

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