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实时荧光定量PCR在周围髓鞘蛋白22基因重复或缺失检测中的应用

张付峰  唐北沙  沈岩  夏昆  张成  陈彪  赵一强  赵国华  严新翔  
【摘要】:目的:应用实时荧光定量PCR在腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)和遗传性压力易感性神经病(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies,HNPP)患者中检测周围髓鞘蛋白22基因(peripheral myelin protein 22,PMP22)重复或缺失;方法:采用实时荧光定量PCR检测113个CMT家系先证者、4个HNPP家系先证者和50例正常人PMP22基因重复或缺失突变。(1)基因组DNA的提取:抽取先证者外周静脉血5-10ml,按常规酚/氯仿法提取DNA。(2) 引物、TaqMan探针合成:实验所用的PMP22基因、albumin(ALB)基因引物和TaqMan探针参见文献,由大连宝生物公司合成。(3)实时荧光定量PCR反应:反应体系为25μl,包括2×TaqMan University PCR混合液12.5μl,10μM正反向引物各 0.5μl,10μMTaqMan探针0.3μl,100ng/μlgDNA0.2μl。反应条件:50℃2min,95℃10min,95℃30s,60℃45s,40个循环。反应设立内对照ALB基因。每个样本进行PMP22基因、ALB基因扩增时均做三次重复,反应在ABI Prism 7000荧光定量PCR仪上进行。PMP22基因与ALB基因的起始拷贝数之比,作为PMP22基因的相对表达量,用于分析。(4)最低循环数值(Ct)比较法计算PMP22基因的相对拷贝数应用△△Ct法,与内对照ALB基因比较可以得出PMP22基因的相对拷贝数,△Ct 是代表每个样本三次重复的平均Ct值,△△Ct=[△CtALB(正常对照样本)-△CtPMP22(正常对照样本)]-[△CtALB(处理样本)-△CtPMP22(处理样本)],PMP22基因的相对拷贝数等于2-(△△Ct+/-s),S代表PMP22基因和ALB基因Ct值的平均标准差SD(standard deviation)。(5)统计学处理采用SPSS统计软件包中独立样本t检验分析数据。结果:113例CMT 患者中有36例发现为PMP22基因重复突变(31.9%),PMP22基因起始拷贝数/ALB基因起始拷贝数值波动于1.50-2.26之间,4例HNPP患者PMP22基因起始拷贝数/ALB基因起始拷贝数值波动于0.42-0.53之间,而50个正常对照均未发现存在PMP22基因的重复或缺失,PMP22基因起始拷贝数/ALB基因起始拷贝数值波动于0.83-1.30之间。结论:我国PMP22 基因重复突变所致的CMT1A占CMT患者的31.9%(36/113),PMP22基因缺失突变是HNPP患者常见的致病原因。

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10 潘星华,庚镇城,谈家桢;MHC基因分子进化研究进展[J];国外医学.遗传学分册;1995年01期
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1 记者 王雨宁;探索生物进化机制[N];科学时报;2002年
2 张小军;重复基因有助生物适应环境[N];科学时报;2002年
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6 陈梓榕;苯丙酮尿症分子诊断方法(下)[N];科学时报;2006年
7 记者 白毅;我国建成高水平药靶筛选技术平台[N];中国医药报;2006年
8 魏红山 成军;乙型肝炎的实验室诊断及质量控制[N];中国医学论坛报;2006年
9 顾定槐;ABI亚太应用支持中心在沪启用[N];中国化工报;2007年
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