可溶性PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化

【摘要】：目的:构建含蛋白转导域(PTD)与脑红蛋白(Ngb)融合基因的表达质粒,原核表达可溶性PTD-Ngb,并鉴定、纯化。方法:提取SD大鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR法构建编码PTD-Ngb的融合基因,克隆人pET28b原核表达载体,转化人大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及可溶性鉴定,并将可溶性表达产物用 Ni-NTA琼脂进行亲和层析纯化。结果:成功构建了含有PTD-Ngb的原核表达载体,插入片段500bp,成功表达并纯化了可溶性PTD-Ngb融合蛋白,相对分子量约为20KD,Western blot鉴定显示表达蛋白具有抗原性,纯化后的融合蛋白纯度可达 99％以上。结论:可溶性融合蛋白PTD-Ngb的表达和纯化对进一步研究Ngb的功能及蛋白转导技术的应用奠定了基础。