在多巴胺能细胞内过量表达hTH及与VMAT抑制协同对细胞生存能力的影响

【摘要】：目的:将人酪氨酸羟化酶(hTH)转染多巴胺能细胞-神经母细胞瘤细胞(SH-SYSY),探讨转染细胞的生存能力及其对MPP+的耐受力。抑制PC12内VMAT1(囊泡单胺转运载体1)的表达后,再将人酪氨酸羟化酶(hTH)转染多巴胺能细胞PC12细胞,探讨细胞的生存能力。方法:第一组,将含野生型(hTH-wt)和变异型人酪氨酸羟化酶(hTH-RREE, Arg37Glu,Arg38Gh变异型,具有持续活性)表达质粒hTH-wt／pcDNA3．1和hTH-RREE／pcDNA3．1转染SY5Y细胞,进行 MTT试验,检测细胞生存能力和对MPP+的耐受性,用caspase-3免疫染色和Hoechst核染色检测转染细胞的凋亡。第二组, 用RNAi技术部分抑制PC12细胞VMAT1表达,同时转染hTH-wt/pcDNA3．1和hTH-RREE／pcDNA3．1,检测细胞生存能力。结果:第一组,SY5Y细胞转染hTH-wt／pcDNA3．1和hTH-RREE／pcDNA3．1和pcDNA3．1对照后24,48,72,96hr进行 MTT试验,48hr后,转染hTH-wt/pcDNA3．1和hTH-RREE／pcDNA3．1的SY5Y细胞,存活者较对照组少,但未达统计学意义。对照组及hTH-wt／pcDNA3．1组用MPP+处理后,hTH-wt／pcDNA3．1组存活细胞少于对照组,但统计意义也不明显。细胞转染hTH-wt／pcDNA3.1和hTH-RREE／pcDNA3．1后凋亡所占比率较对照组增多。第二组,用RNAi抑制VMAT1表达后,PC12细胞存活能力下降;RNAi抑制VMAT1同时转染hTH-RREE／pcDNA3．1后细胞存活能力进一步下降。结论: SY5Y细胞转染hTH后引起少量细胞死亡,细胞凋亡参与了表达hTH的SY5Y细胞死亡过程。多巴胺能细胞内的VMAT1 对过表达hTH细胞有一定的保护作用,这可能解释多巴胺的增多并不引起多巴胺能细胞大量损伤,而当VMAT1减少后, 多巴胺增多对多巴胺能的细胞毒性方能显现出来。