RNA干扰抑制Dicer基因表达及其对干扰作用的影响

【摘要】：正目的:通过RNA干扰技术抑制Dicer。基因表达,以探讨Dicer酶在RNA干扰机制中的作用。方法:将Dicer 基因的RNA酶Ⅲ结构域作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上．构建成抗Dicer基因的shRNA表达载体,先将其转染HepG2、2．2．15和结肠癌细胞,通过RT-PCR方法评价Dicer基因表达受抑制的情况;再将其转染整合了绿色荧光蛋白(GFP)的 HepG2细胞,用RT-PCR方法评价Dicer基因表达受抑制的情况,2天后,再转染抗GFP的shRNA表达载体, 通过RT-PCR方法评价GFP基因表达受抑制的情况。以先转染不表达shRNA的空载体,再转染抗GFP的shRNA 表达载体组为对照。通过上述方法,来了解Dicer基因受抑制后,是否影响后续shRNA表达载体的功能发挥。