不同蛋白涂层对骨髓间充质干细胞在脱细胞牛心包片上粘附生长的影响

【摘要】：背景组织再生的研究中发现脱细胞生物材料能作为一种具有天然微环境结构的支架以利于宿主细胞的种植再生,但是在这些组织材料上提高细胞的贴附力仍然是一个难题。尽管已经尝试一些诸如在培养基内添加生长因子、脉动流培养等方法,这一问题仍然没有很好的解决。目的研究表明在生物材料表面应用蛋白预涂层能提高种植细胞的贴附生长能力。在本实验中,我们通过在脱细胞牛心包片上不同蛋白预涂层,观察鼠骨髓间充质干细胞在其上的贴附生长情况,研究蛋白涂层对细胞黏附生长的影响。方法我们采用酶消化结合去污剂洗涤法制作脱细胞牛心包片支架,将三种蛋白(纤维连接蛋白、明胶蛋白、Ⅰ型胶原蛋白)均匀涂层在支架表面。将骨髓间充质干细胞从大鼠股骨髓中分离出来并培养扩增,传至第三代以2×106／ml的密度接种到不同蛋白涂层的脱细胞牛心包片支架上,未涂层组作为对照。不同时间点采用Hochest染色观察骨髓间充质干细胞在不同涂层支架上贴附生长情况,48小时采用MTT法定量分析。结果 Hochest染色显示骨髓间充质干细胞在纤维连接蛋白及明胶蛋白涂层支架上贴附生长比在Ⅰ型胶原蛋白涂层和不涂层对照组支架上多许多。各组MTT的OD值分别为纤维连接蛋白组(0．8768±0．0926),明胶蛋白组(0．8032±0．0912),Ⅰ型胶原蛋白组(0．3851±0．0322)空白对照组 (0．3076±0．0369)。纤维连接蛋白及明胶蛋白涂层对骨髓间充质干细胞贴附增殖能力比Ⅰ型胶原蛋白涂层和不涂层组明显增强,具有统计学意义(P0．001)。而骨髓间充质干细胞的贴附生长在纤维连接蛋白涂层和明胶蛋白涂层之间以及Ⅰ型胶原蛋白涂层和不涂层对照组之间上没有明显差异(P0．05)。结论脱细胞牛心包片上纤维连接蛋白涂层及明胶蛋白涂层能明显提高种植细胞的贴附增殖能力,而Ⅰ型胶原蛋白涂层对种植细胞的贴附增殖没有明显的改善。