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SARS病毒核蛋白的原核表达及间接ELISA的初步建立

张强  高正琴  周育森  贺争鸣  吴昊  
【摘要】:目的 探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)重组核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白)的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法 通过RT-PCR获得SARS-CoV核衣壳蛋白N基因,将N基因克隆至pPET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。采用凝胶电泳回收纯化。结果 经Western-blot,动物免疫试验证实N蛋白为SARS-CoV特异性蛋白,可刺激机体产生相应的抗体,具有良好的抗原性和免疫原性。在此基础上,建立间接ELISA法检测36名健康人血清及地坛和佑安医院急性期和恢复期病人血清,以健康人A450均值的2.1倍为阳性临界值,结果发现地坛医院20名急性期病人IgG阳性率为100%,佑安医院24名病人IgG阳性率为95.8%,两医院恢复期病人IgG阳性率均为100%。结论 SARS-CoV重组N蛋白抗原具有较强免疫原性,在SARS血清学诊断试剂研制方面具有重要价值。

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