【摘要】：目的:制作四氧化二氮(N2O4)吸入中毒致急性肺水肿动物模型,探讨中毒小鼠血清的蛋白组学变化,从而为本课题进一步研究N2O4中毒后出现肺纤维化和肺部肿瘤的发病机制提供帮助。方法:利用军事医学科学院提供的120升标准染毒柜,制作四氧化二氮吸入中毒致急性肺水肿的动物模型。取动物血清在美国Ciphergen公司生产的表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF)上进行蛋白组学分析。采用蛋白飞行质谱仪(PBSⅡ--C型)对结合在弱阳离WCX2芯片上的血清蛋白进行读取分析,采用Ciphergen Proteinchip3．1版本的分析软件自动采集数据,采用Biomarker Wizard软件分析实验前后血清的蛋白质指纹图谱差异。结果:分子量(Da)为3668、3870、4728、4900、5815一组的标志蛋白蛋白的表达变化升高,分子量(Da)为13619、13816二者的标志蛋白表达变化下降。结论:SELDI-TOF蛋白质谱技术的基本原理是利用化学或生物学方法在载体表面制作点状芯池,形成化学表面芯片探针或生物表面芯片探针, 前者分为可结合某些阳离子或阴离子的化学基团、金属离子鳌合化学基团和亲水或疏水物质等种类,用于检测未知蛋白并获取指纹图谱;后者分为抗体-抗原、受体-配体和DNA-蛋白质结合等种类,可检测与之相结合的抗原或配体的不同分子量亚型。检测时将标本如血清、尿液、细胞培养液等直接加入芯池,样品中蛋白与特定探针结合后,在原位洗去非特异结合物质,再加人能量吸收剂(与蛋白形成混合结晶,促进蛋白质的解析附和离子化),经室温自然干燥后上机检测。样品中蛋白质经激光脉冲辐射解析形成荷电离子, 质荷比不同的离子在仪器场中飞行时间不同,检测器可将其捕获并绘制成质谱图,经计算机软件处理获得蛋白质的相对分子质量、含量等信息,并可直观地以扫描图谱、电泳样图谱或棒图的形式展示。关于四氧化二氮中毒小鼠的蛋白组学变化,国内文献检索还未见有报道。四氧化二氮染毒后可导致小鼠血清的蛋白组学有明显变化,为本课题进行下一步相关实验研究提供了很大帮助。