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SEA和B7-1基因真核共表达载体的构建及在B16细胞的表达

司少艳  隋延仿  李增山  宋宏萍  黄亚渝  叶菁  陈广生  张秀敏  
【摘要】:目的构建SEA和小鼠B7-1基因真核共表达载体,观察其在小鼠黑色素瘤细胞系B16细胞膜上的表达情况。方法采用RT-PCR方法从小鼠脾脏克隆了小鼠B7-1基因,构建至pIRES2-EGFP载体上;用已构建的重组逆转录病毒载体pLXSN-SEP为模板,采用PCR方法,对SEA-B7tm基因进行了亚克隆;最后将小鼠B7-1、内部核糖体进入位点、SEA-B7tm基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1+上。利用阳离子脂质体将重组质粒转染B16细胞,间接免疫荧光法检测B7-1和SEA分子在B16细胞膜表面的表达情况。结果重组质粒经KpnI和XbaI酶切后,电泳显示约1.1kb、1.4kb和5.4kb三个片段;测序结果与Genebank中公布的SEA-B7tm基因、小鼠B7-1cDNA序列相符,双标记间接免疫荧光检测结果表明B7-1、SEA同时在转染重组质粒的B16细胞膜上表达。结论成功构建了SEA和小鼠B7-1真核共表达载体,使两种分子同时能够表达在肿瘤细胞膜表面,为进一步研究SEA和B7-1联合应用抗肿瘤免疫治疗及其免疫机理奠定了基础。

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