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重复电针预处理通过大麻素CB1受体激活ERK1/2通路诱导脑缺血耐受

杜鹃  王强  胡博  朱萧玲  赵宁侠  侯丽宏  朱正华  熊利泽  陈绍洋  
【摘要】:目的:研究发现ERK1/2通路参与大麻素CB1受体激活所介导的神经保护作用和抗焦虑作用等效应。我们的研究已经证实电针预处理通过激活CB1受体诱导大鼠脑缺血耐受,且大量研究证实,在缺血和非缺血预处理中诱导脑缺血耐受均有ERK1/2通路参与。故本实验拟观察重复电针预处理是否通过大麻素CB1受体激活ERK1/2通路从而诱导脑缺血耐受。方法:1.雄性SD大鼠40只,随机分为4组:Control组(CON组)、电针组(EA组)、AM251(CB1受体拮抗剂)组和AM251+EA组。CON组:行戊巴比妥钠(40mg/kg,i.p.)麻醉;EA组:麻醉后取"百会"穴,选用疏密波、频率2/15 Hz、电流强度1mA,持续电刺激30min;AM251组:腹腔注射AM251 1mg/kg并麻醉;AM251+EA组:电针前30min腹腔注射AM251 1mg/kg。以上处理重复5天。各组大鼠分别在末次处理后2h和24h行Western blotting检测脑内ERK1/2磷酸化水平。2.雄性SD大鼠45只,除Sham组,其余分组同上并在末次处理后24h行MCAO,缺血2h,再灌注2h和24h分别行Western blotting检测脑内ERK1/2磷酸化水平。Sham组大鼠栓线不插入大脑中动脉,其余操作同CON组。3.雄性SD大鼠48只,随机分为6组:Sham组、CON组、EA组、U0126组(MEK1/2抑制剂)、U0126+EA组和DMSO+EA组。Sham组、CON组和EA组的处理同上。U0126+EA组:电针前30min腹腔注射U01260.5mg/kg;DMSO+EA组:电针前30min腹腔注射20%DMSO 0.6ml/kg。以上处理重复5天。除sham组,其余大鼠均在最后一次预处理后24h行短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型。缺血2h,再灌注24h后行神经功能评分(NFS)和脑梗死容积百分比测量。结果:1.末次EA预处理后2h,EA组p-ERK蛋白表达水平与CON组相比明显增强(P0.05);AM251+EA组与EA组相比p-ERK蛋白表达水平明显降低(P0.05)。末次EA预处理后24h,EA组p-ERK蛋白表达水平与CON组相比无显著性差异。2.再灌注2h、24h,EA组p-ERK蛋白表达水平与CON组相比明显增强(p0.05);AM251+EA组与EA组相比p-ERK蛋白表达水平明显降低(P0.05)。3.EA组的NFS明显优于CON组(P0.01);U0126+EA的NFS与CON组相比无统计学差异(P0.05)。EA组的脑梗死容积百分比明显小于CON组(P0.01);U0126+EA的脑梗死容积百分比与CON组相比无统计学差异(P0.05)。结论:重复电针预处理可以增强大鼠脑内磷酸化ERK1/2的表达水平;且可以增强缺血再灌注后大鼠脑内磷酸化ERK1/2的表达水平。采用MEK1/2(ERK1/2上游激酶)抑制剂U0126阻断ERK1/2通路激活可以逆转重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受,说明ERK1/2通路激活参与重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受。CB1受体拮抗剂AM251可以逆转重复电针预处理所引起的大鼠脑内磷酸化ERK1/2的表达水平增强,说明重复电针预处理诱导ERK1/2通路激活依赖CB1受体。因此推断重复电针预处理通过大麻素CB1受体激活ERK1/2通路从而诱导脑缺血耐受。

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