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白花蛇舌草调控TGF-β/Smad通路介导的EMT抑制大肠癌细胞转移的机制研究

靳祎祎  杨弘  魏丽慧  彭军  林久茂  
【摘要】:大肠癌(包括结、直肠癌)是一类常见的消化道恶性肿瘤,严重危害人类健康。大量临床数据表明,大多数患者被诊断为大肠癌时已处于晚期(Ⅳ期)并伴有转移,且90%以上大肠癌患者的死亡由远处转移所致。可见,转移是影响大肠癌治疗、预后并导致死亡的最主要因素,因此,防治大肠癌转移是治疗大肠癌、提高患者生存率的关键。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是大肠癌转移的主要因素和机制之一,而TGF-β/Smad通路在其发生过程中发挥着重要的作用。白花蛇舌草(Hedyotis Diffusa Willd,HDW)是临床治疗肿瘤的常用中药之一,其显著疗效且无明显毒副作用。课题组前期体内外实验证实白花蛇舌草可通过多条信号转导通路调控多个基因,诱导大肠癌细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤血管新生、逆转大肠癌细胞5-FU耐药及抑制大肠癌细胞迁移等;但白花蛇舌草抑制大肠癌转移的作用机制尚不清楚。目的研究白花蛇舌草对大肠癌细胞转移及TGF-β/Smad介导EMT的影响,以进一步揭示其抗大肠癌的分子机制,为临床应用提供科学依据。方法采用白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW)对人大肠癌细胞HCT-8进行药物干预,并检测EEHDW对外源性的TGF-β诱导大肠癌细胞EMT的影响。用倒置显微镜观察EEHDW对HCT-8细胞生长的影响以及用TGF-β诱导后细胞形态的改变;用MTT法检测白花蛇舌草对HCT-8细胞活力的影响;采用Transwell法研究白花蛇舌草对HCT-8细胞迁移、侵袭的影响;采用Western Blot检测白花蛇舌草对HCT-8细胞EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)及TGF-β/Smad通路(TGF-β、Smad2/3、Smad4)及其活化(p-Smad2/3)的影响。结果经EEHDW干预后,HCT-8细胞的增殖受到抑制,并呈剂量依赖性,而用TGF-β诱导后,对细胞增殖能力的影响不明显;EEHDW可抑制细胞的迁移、侵袭能力,并呈剂量依赖性,而TGF-β可明显增加HCT-8细胞的迁移、侵袭能力;EEHDW可抑制EMT标志蛋白N-cadherin、Vimentin的表达,促进E-cadherin的表达,TGF-β/Smad通路(TGF-β、Smad2/3、Smad4)及其活化(p-Smad2/3)受到显著抑制,而TGF-β诱导可以上调N-cadherin、Vimentin的表达,下调E-cadherin的表达,并上调TGF-β/Smad通路中相关蛋白的表达。结论 EEHDW可通过抑制TGF-β/Smad通路介导的EMT,从而抑制大肠癌细胞的转移能力。

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