TNF-α对肠粘膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能的影响

【摘要】：TNF-α是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用,因此,研究TNF-α与谷氨酰胺载体之间关系对提高感染状态下谷氨酰胺疗效有重要意义。目的:研究TNF-α对IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法:体外培养肠黏膜上皮细胞株--IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2小时后,测定细胞[3H]-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/ml TNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10小时)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6小时)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果:实验组(不同TNF-α剂量)[3H]-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P0.01),实验组之间无显著差异;实验组(不同时段)ASCT2载体mRNA水平2小时显著高于对照组(P0.01),时间延长后逐渐下降,10小时仍与对照组无显著性差异;实验组(不同时段)载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P0.01),实验组间无明显差异。结论:TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达,因此TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能是发生在载体蛋白的翻译或以后水平。