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microRNAs在CCl_4诱导小鼠纤维化肝脏中的差异表达谱研究

王清兰  吕靖  陶艳艳  闫秀川  李俊霞  刘成海  
【摘要】:目的:应用microRNAs(miRNAs)芯片技术研究miRNA在CCl_4小鼠纤维化肝脏中的差异表达谱,并基于Gene Ontology(GO)分析发现差异miRNAs调控的主要功能。材料与方法:CCl_4皮下注射复制小鼠肝纤维化模型,分为正常组及模型组;提取各组小鼠肝组织总RNA,应用Agilent小鼠microRNA寡核苷酸基因芯片(mouse miRNA microarray Agilent v12.0)检测各组小鼠肝脏miRNAs表达谱。用随机方差模型t检验筛选两组间的差异miRNAs,并预测其靶基因。对靶基因进行显著性功能分析(GO analysis)发现差异miRNAs调控的主要功能。结果:正常肝组织与模型肝组织间共筛选出39个差异miRNAs,其中模型组较正常组上调的23个,下调的16个。GO分析结果显示:模型组较正常组上调的miRNA所对应的靶基因共参与80项显著性功能,其中蛋白氨基酸磷酸化、凋亡、细胞粘附、细胞分化、细胞增殖的正向/负向调控、离子转运、蛋白氨基酸自动磷酸化为miRNA调控的最关键的功能。模型组较正常组下调的miRNA所对应的靶基因共参与54项显著性功能,其中蛋白氨基酸磷酸化、凋亡的负调控、细胞增殖的负向调控、细胞粘附、细胞周期、炎症反应、诱导凋亡、蛋白代谢过程的调控、Wnt受体信号转导通路为miRNA调控的最关键的功能。以miRNA所调控的GO的个数来衡量miRNA的地位,发现关键的上调miRNA包括:mmu-miR-322,mmu-miR-15b,mmu-miR-195,mu-miR-200b,mmu-miR-214,mmu-miR-27a,mmu-miR-106b;其中有报道表明mmu-miR-322在低氧诱导的内皮细胞中表达升高,可促进血管新生,抑制细胞周期:mmu-miR-15b可抑制细胞周期;mmu-miR-195可促进凋亡并可能与肿瘤相关;mmu-miR-200b可上调TGF-β1表达;mmu-miR-27a在活化的HSC中表达升高。关键的下调miRNA包括:mmu-miR-16,mmu-miR-130a,mmu-miR-101b,mmu-miR-30a,mmu-miR-30e,mmu-miR-30c,mmu-miR-101a,mmu-miR-140;其中有报道表明mmu-miR-16在活化星状细胞中表达降低、mmu-miR-30c及mmu-miR-10la在纤维化肝脏中表达降低。结论:纤维化肝组织miRNA表达较正常肝组织发生明显变化,肝纤维化形成的各个环节,包括细胞的增殖与活化、细胞凋亡、细胞粘附、细胞迁移等都可能受miRNAs的调控。

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