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黄芪含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

张继江  周亚滨  
【摘要】:目的:本研究通过拆方观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H_2O_2诱导HUVEC(人脐静脉内皮细胞)氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心病不稳定型心绞痛的确切作用机制,为中药新药的进一步研发提供客观依据。本实验属"养心汤"研究系列一部分。方法:20只Wistar大鼠随机分为2组,分别为黄芪组和空白组。制备黄芪药液浓度为1.03g/ml(给药剂量=临床常用量×动物等效面积系数×5),空白组给予等剂量生理盐水灌胃每日给药2次,早晚各一次,连续给药1周,于末次给药后1h心脏取血离心备用。将冻存HUVEC复苏后,对HUVEC培养、传代。将HUVEC与单味黄芪含药血清不同剂量浓度(2%、4%、6%)一起培养。实验分为5组:空白血清组:在空白血清培养液中连续培养26h;模型对照组组:在基础培养液中连续培养24h后,加入100μmol·L~(-1)H_2O_2作用2h;(H_2O_2的浓度及作用时间均为预实验结果);黄芪含药血清2%组:在基础培养液中加入2%黄芪含药血清培养24h后加入H_2O_2作用2h;黄芪含药血清4%组:在基础培养液中加入4%黄芪含药血清培养24h后加入H_2O_2作用2h;黄芪含药血清6%组:在基础培养液中加入6%黄芪含药血清培养24h后加入H_2O_2作用2h;通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H_2O_2损伤HUVEC生长活性变化。结果:黄芪含药血清2%、4%、6%各组细胞OD值均较H_2O_2模型对照组明显升高,与H_2O_2模型组相比较均有统计学意义(p0.01)。4%浓度组较为明显,而在6%时最为显著。且2%、4%、6%组间比差异有统计学意义(p0.05)。形态学:2%组:胞体积变小,间隙明显变大,彼此之间联系较少,细胞脱落明显,细胞变形、皱缩的程度有所改善;4%组:细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,部分细胞脱落;皱缩的程度改善最为明显;6%组:细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善;结论:1黄芪含药血清可以促进H_2O_2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抵制氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。2对于预防HUVEC氧化损伤具有明显的促进作用,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制之一。

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