黄芩苷防护中波紫外线损伤HaCaT细胞的蛋白质组学研究

【摘要】：目的:探讨传统中药黄芩苷(baicalin)防护人表皮角质形成细胞被中波紫外线(UVB)损伤的蛋白质组学机制,为将黄芩苷作为防晒的有效药物提供实验依据。方法:培养HaCaT细胞,以30mJ/cm~2UVB和100(g/mL浓度的黄芩苷处理细胞,提取总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳进行分离,经Imaging-Master2D软件分析以发现差异表达蛋白,并对部分差异表达蛋白进行质谱分析,测定其肽质量指纹图谱,在网上蛋白质数据库检索鉴定差异蛋白,寻找HaCaT细胞有效的功能蛋白及黄芩苷可能的作用靶点,并用Western blot对部分质谱鉴定的差异蛋白做进一步验证。结果:二维凝胶电泳图像分析结果显示:①黄芩苷组与正常组比较:发现18个差异蛋白点。②黄芩苷组与照光同时加药组比较:发现46个差异蛋白点。质谱鉴定17个蛋白,其中蛋白酶激活亚基2、甘油三磷酸脱氢酶、SKP1同源基因抑制G2亚型2、蛋白酶调节亚基7四个蛋白及热休克蛋白等与细胞骨架,代谢,氧化应激,抗凋亡,细胞运动等有关。Western blot进一步验证了上述结果。结论:黄芩苷和中波紫外线作用HaCaT细胞后可引起多种蛋白表达发生变化,上述所列的蛋白等表达水平的改变可能通过干扰细胞内能量代谢、细胞骨架结构及形态细胞转化凋亡、免疫应激等生理过程影响了人表皮角质形成细胞的生长,而这也许正是黄芩苷防护中波紫外线损伤人表皮角质形成细胞的重要机制,为我们进一步研究黄芩苷在蛋白质分子水平的抗紫外线损伤作用机制提供了较新、并且较直接的证据。