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人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180-NC16A单链抗体的构建及表达

孙娜娜  王欲晓  周丽君  王刚  
【摘要】:目的:用基因工程技术制备人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体(scFv),并对其抗原结合特性等进行鉴定。方法:利用基因重组技术对从噬菌体抗体库中克隆的人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180-NC16A抗体Fab片段进行改造获得scFv,进行DNA测序,同时用ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性,免疫荧光技术检测scFv与人皮肤组织BP180抗原的结合。结果:成功构建了抗BP180-NC16A scFv并获得可溶性表达,DNA测序结果表明,单链抗体的Vλ和VH基因序列完全正确,ELISA证实可溶性表达的scFv抗体具备良好的抗原结合活性和特异性。免疫荧光检测该抗体在人皮肤表皮真皮交界处基底膜带呈现线状结合条带。结论:成功构建并表达了人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180-NC16A的单链抗体,为进一步研究该抗体的生物学作用奠定了基础。

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