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人源性单纯疱疹病毒Ⅱ型抗gD蛋白噬菌体单链抗体库的构建

王颖  杨慧兰  樊建勇  
【摘要】:目的:利用HSV-2病毒IgG、IgM抗体阳性的生殖器疱疹患者外周血淋巴细胞,构建人源单链抗体库。方法:从病人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA,以其为模板,利用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和噬菌体表面展示技术,合成全套人抗体可变区基因,并将重链、轻链可变区基因进行拼接装配成单链抗体(scFv)基因,并重组到噬菌粒载体pFAB5c中,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌 XL-1 Blue,酶切鉴定抗体库的重组率,并测定噬菌体抗体库的库容量。结果:成功构建人源性单纯疱疹病毒抗gD蛋白噬菌体抗体库,库容达1.86×106 结论:利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术可以成功构建人源性单链抗体库,并达到建库标准,可从中筛选人源单链抗体,为进一步的研究基因工程抗体打下基础。

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