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应用四色流式细胞术同时检测Th、Tc细胞亚群(摘要)

许勇钢  杨晓红  张姗姗  麻柔  
【摘要】:【目的】:建立四色流式细胞术通过检测细胞内细胞因子同时测定Th亚群(Th1、Th2、Th0)和Tc亚群(Tc1、Tc2、Tc0)的方法。【方法】采用四色数流式细胞技术,测定体外激活的人外周血Th、Tc细胞INF-γ和IL-4的表达。【结果】检测健康人外周血Th细胞中Th1细胞(CD_4~+ IFN-γ~+/IL-4~_)为(19.5±5.4)%,Th2细胞(CD_4~+IFN-γ~-/IL-4~+)为(1.85±0.43)%,Th0细胞(CD_4~+IFN-γ~+/IL-4~+)占(0.37±0.15)%;Tcl细胞(CD_8~+IFN-γ~+/IL-4~-)为(33.8±9.7)%,Tc2细胞(CD_8~+IFN-γ~-/IL-4~+)为(1.47±0.75)%,Tc0细胞(CD_8~+IFN-γ~+/IL-4~+)占(0.68±0.27)%未见性别差异。采用先标记CD4-Pc5,然后再进行PMA-ionomycin刺激培养方法CD4分子荧光强度降低,而对CD4分子表达百分比元明显变化,仍可用CD_4~+来确定Th细胞;刺激培养18h后再标记CD8-ECD,最后标记细胞内IFN-γ-FITC和IL-4-PE。【结论】:应用四色流式细胞术检测Th亚群(Th1、Th2、Th0)和Tc亚群(Tc1、Tc2、Tc0),具有相对简单、准确的特点,应广泛采用。

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