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肝纤维化中瘦素表达变化与扶正化瘀方干预作用

孙保木  崔红燕  宣红萍  姜哲浩  刘成海  
【摘要】:背景与目的瘦素是肥胖基因表达的16kd的多肽产物,主要由脂肪组织产生,具有调节能量平衡、脂肪代谢与机体免疫等多种生物学功能。近5年来有研究显示,瘦素促进CCl_4中毒肝纤维化大鼠的肝脏炎症反应与肝纤维化病理进程,促进培养肝星状细胞的胶原基因表达,功能瘦素缺乏大鼠不能由脂肪性肝炎发展为肝纤维化,提示瘦素在肝纤维化病理形成中有重要作用。但是,尚不清楚肝脏本身是否表达瘦素;如果表达,在肝纤维化过程中有何种规律性变化,其促肝纤维化的分子机制如何等等。因此,本研究动态观察肝纤维化模型大鼠血清与肝脏中瘦素基因与蛋白的表达变化,及其与肝纤维化病理发展的关系;并以扶正化瘀方干预,探讨肝纤维化中瘦素的表达变化与作用,及扶正化瘀方影响瘦素表达的抗肝纤维化作用机制。方法复制CCl_4与二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)2种肝纤维化模型大鼠,CCl_4模型动态观察6w,并自造模之日起灌胃给予扶正化瘀方药液。DMN模型造模4w,成模后用药4w,动态观察造模与停止染毒后的模型变化,共8w。肝组织HE染色与天狼猩红胶原染色,瘦素与α—平滑肌肌动蛋白(smoothmuscle actin,SMA)免疫组化染色。盐水水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,ELISA检测血清瘦素含量,western印迹法分析肝组织瘦素、Ⅰ型胶原与α—SMA等蛋白表达水平。Northern印迹杂交分析肝组织瘦素基因表达水平。结果血清瘦素水平造模早期下降,而后升高,与肝羟脯氨酸含量及肝组织瘦素蛋白水平无明显相关性,与大鼠体重变化显著相关。肝组织有瘦素蛋白表达,主要分布于组织变性坏死区与汇管区,与α—SMA分布位置大致相似;随染毒持续,瘦素蛋白与基因表达水平增加,DMN模型中染毒停止后瘦素蛋白表达略有下降,肝脏瘦素蛋白与肝组织中羟脯氨酸含量、Ⅰ型胶原及α—SMA蛋白水平正相关。扶正化瘀方减轻肝脏胶原沉积与肝组织羟脯氨酸含量,减少肝脏瘦素蛋白表达。结论肝脏表达瘦素基因与蛋白,不仅是瘦素的效应器官,也是生成器官。随肝纤维化的发展,肝脏瘦素表达逐渐增加,与肝星状细胞活化与肝纤维化程度明显相关,有促肝纤维化的作用。血清瘦素主要反映大鼠体重变化,与肝纤维化病理无关。扶正化瘀方抑制肝脏瘦素蛋白表达,该作用是扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制之一。

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