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8-MOP/UVA作用下体外培养的真皮成纤维细胞线粒体DNA复制控制区点突变研究

刘仲荣  刘荣卿  张国威  
【摘要】:目的:以8—甲氧补骨脂素/长波紫外线作用体外培养的真皮成纤维细胞建立皮肤光老化体外细胞模型,探讨皮肤光老化与真皮成纤维细胞线粒体DNA复制控制区点突变的关系。方法:8—MOP/UVA作用体外培养的真皮成纤维细胞,一步法提取线粒体DNA,PCR方法扩增线粒体DNA复制控制区D环及毗邻转录启动子区域片段6(D-looP and adjacent transcription Pro-moter 6 DLP_6)并以聚合酶链反应—单链构象多态性及直接测序的方法检测PCR产物的点突变。结果:一步法迅速提取的各组细胞mtDNA,紫外分析呈现典型的核酸紫外吸收光谱曲线,电泳分析,可见16.5Kb处有清晰的条带;DLP_6PCR产物经2.5%琼脂糖凝电泳,所有标本在244bp处均有明亮清晰条带,PCR—SSCP分析,A组的12份标本中,有1份标本显示一条单链,另有6份标本表现为一条单链减慢,而其它各组每组12份标本均在相同位置出现两条单链,无SSCP泳动异常;DNA测序仪序列测定,7份SSCP泳动异常标本DLP_6片段上发生了A414C(T414G)特异性的点突变。结论:真皮成纤维细胞线粒体DNA复制控制区DLP_6片段出现大量特异性点突变可能与皮肤光老化有密切关系。

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