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人天然抗体库的构建及抗角蛋白抗体的筛选

王刚  刘玉峰  
【摘要】:目的:构建较大容量的人源性天然抗体库并筛选抗角蛋白单克隆抗体。方法:以未经免疫的健康人外周血单个核细胞为基因来源,扩增多样性的k轻链基因和IgG/IgM重链Fd段基因,分别构建轻链库和重链库,然后组合为Fab段表面展示的噬菌体抗体库。通过多次重组积累达到理想的库容,以人表皮角蛋白等抗原对抗体库进行筛选和鉴定。结果:经过5次轻、重链基因的重组和转化,获得了库容为1×10~9的人源性天然抗体库。该抗体库性能良好,经“亲和吸附—洗脱—扩增”淘筛,获得针对角蛋白和其他抗原的7株特异性噬菌体抗体。结论:天然抗体库是制备人源性单克隆抗体的有效技术平台,用基因工程的方法制备人源性抗角蛋白抗体,为其功能和临床应用的进一步研究打下了基础。

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