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入侵植物牛膝菊ISSR-PCR反应体系的建立与优化(第2组)

孔令群  齐淑艳  杨彩霞  冯典兴  
【摘要】:牛膝菊(Galinsoga parviflora)为菊科植物,一年生杂草。1964年在辽宁省大连市星海公园发现为东北地区新记录种。目前牛膝菊在沈阳地区正呈现爆发式生长态势,其繁殖力强,传播速度快,严重影响土地的利用,给社会经济、生态造成重大影响。入侵种群的分子标记分析是外来入侵生物研究的重要途径。ISSR分子标记技术在物种和种群遗传分化、亲缘关系分析等研究方面的应用非常有效,已成为入侵生态学研究中强有力的工具。但其扩增结果易受Mg2+、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA等因素的影响。本研究通过5因素4水平的正交试验,对上述5个因子进行优化,目的是建立一个稳定、可靠的牛膝菊的ISSR反应体系,为牛膝菊的分子鉴定和遗传多样性的分析提供一个标准的反应体系。本试验采用CTAB法对牛膝菊基因组DNA进行提取,ISSR引物参照加拿大哥伦比亚大学UBC公司2006年公布的序列,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,经初步筛选出的引物UBC848作为本次正交试验的固定引物。退火温度为55℃,原初的扩增反应条件为25μLPCR反应体系,1×Taq酶缓冲液,所有反应均在美国BIORAD公司生产的梯度热循环仪(PCR)中进行,扩增产物在1%的琼脂糖凝胶(Genefinder染色)中电泳,电泳缓冲液为1×TBE,以DL2000(Takara)作为分子标记。电泳凝胶用BIORAD凝胶成像分析系统进行拍照和分析。对PCR结果应用DPS数据处理软件进行极差分析和方差分析,结果优化体系(25μL)为:Mg2+浓度2.0mmol·L-1,dNTP浓度0.5mmol·L-1,Taq DNA聚合酶浓度0.08U·μL-1,引物浓度为0.2μmol·L-1,DNA浓度为1.0ng·μL-1。同时利用上述反应体系和反应程序筛选出扩增稳定、多态性高、扩增条带清晰的ISSR引物10条(UBC816、UBC817、UBC818、UBC826、UBC846、UBC847、UBC855、UBC857)和相应的退火温度(51.4℃、51.4℃、53.8℃、53.4℃、55.0℃、53.1℃、51.2℃、54.7℃)。应用该体系对牛膝菊10个不同种群进行扩增,结果显示不同种群牛膝菊的电泳主条带清晰度均较高。

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1 方海;美国研究入侵植物[N];中国花卉报;2004年
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7 谷国强;对外来植物不必谈虎色变[N];大连日报;2007年
8 禾子;警惕外来毒草祸害国内植物[N];上海科技报;2003年
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