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金丝桃苷调控大鼠脑基底动脉TRPV4激活EDHF改善缺血性脑损伤及其具体靶点的作用机制研究

徐杭杭  王书凡  程小龙  郑咏秋  韩军  
【摘要】:目的探讨金丝桃苷通过IP3/PKC信号通路调控大鼠脑基底动脉TRPV4激活EDHF改善缺血性脑损伤的作用机制研究。方法以改良四血管阻断法(4-VO)建立大鼠缺血/再灌注模型(IR):运用动脉加压灌注法,离体观察Hyp对U46619预收缩IR大鼠CBA的舒张作用及TRPV4特异性阻断剂HC-047067对其的影响;HE及尼氏染色观分别察IR大鼠脑组织病理变化:采用ELISA法测定IR大鼠血清中MDA含量与LDH活性:采用蛋白质印记法,在体观察Hyp对IR大鼠脑血管内皮细胞TRPV4蛋白表达及各靶点通路阻断剂对其的影响;采用激光共聚焦观察IR大鼠脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)强度的变化;运用流式细胞技术观察IR大鼠CBA内皮细胞凋亡情况结果与正常组相比,递增浓度的Hyp可诱导IR大鼠离体CBA产生剂量依赖性的舒张效应。去除一氧化氮(NO)与前列环素(PGI2)舒张作用后,Hyp仍能诱导IR大鼠CBA产生明显的舒张效应,且此效应可被TRPV4通道阻断剂HC-067047抑制:Hyp可明显减轻IR大鼠病理学改变:并且可明显上调IR大鼠脑血管TRPV4蛋白表达,IP3/PKC信号通路阻断剂可明显抑制TRPV4蛋白表达;IR大鼠血清中MDA含量与LDH活性明显提高;Hyp可明显降低IR大鼠脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)荧光强度,而各靶点通路阻断剂组Ca~(2+)荧光强度则有不同程度增强;IR组大鼠内皮细胞凋亡率明显升高,用药Hyp后,凋亡率明显下降,而各阻断剂组均有不同程度升高结论 Hyp能改善缺血/再灌注损伤,其机制可能与IP3/PKC信号通路调控TRPV4,进而激活IKca,SKca通道,从而促进EDHF产生血管舒张反应有关。

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