收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

以神经系统变性疾病患者干细胞治疗需求为定位目标:使用脑脊液诱导人间充质干细胞分化为神经干细胞的试验研究及临床应用初探

任超  丁红梅  朱芳芳  陈浩  葛巍  刘小云  万美蓉  耿德勤  
【摘要】:目的:(1)探索神经系统变性疾病(Neurodegenerative diseases,NDD)患者脑脊液(Cerebrospinal fluid,CSF)诱导人间充质干细胞(Human mesenchymal stem cells,hMSCs)定向分化为神经干细胞(Nepal stem cells,NSCs)的可行性,并观察、比较不同诱导剂(CSF、生长因子)诱导不同来源间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)分化为NSCs的天数及细胞数,从而为有干细胞治疗需求的NDD患者提供临床适用、实用的MSCs体外扩增、定向分化方案。(2)观察、对比不同来源hMSCs(骨髓源、脐血源)及其经CSF诱导获得的NSCs通过腰椎穿刺鞘内注射(Lumbar puncture intrathecal iniection,LP-II)的方法移植治疗NDD的临床疗效和安全性,从而为有干细胞治疗需求的特定患者提供适用、实用的个体化干细胞治疗模式。方法:在知情同意的前提下,根据纳入和排除标准,纳入有干细胞治疗需求的NDD患者为试验对象。骨髓细胞学分析后对其进行分组:其中细胞增生程度、细胞计数、细胞比例正常者进入骨髓源干细胞治疗组,设为A组;否则进入脐血源干细胞治疗组,设为B组。在分出A、B组后进行:(1)A组者取自身骨髓获取骨髓源间充质干细胞(Bone marrowmesenchymal stem cells,BMMSCs),B组者取足月健康顺产新生儿获取脐血源间充质干细胞(Umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCBMSCs),并用倒置显微镜和电镜观察、流式细胞分析、免疫组化和荧光免疫组化分析及反转录聚合酶链反应分析等方法对目的细胞进行鉴定,并记录目的细胞达临床可用数量级(107/ml)时所需的时间及所获得具体细胞计数。(2)将获得MSCs,取一定量,通过LP-II法对患者进行首次干细胞移植治疗,治疗前需对患者用特定神经功能量表(PD-UPDRS、Dementia-MMES、MND-改良Norris、MSA—ICARS),生活活动能力量表(BI)及生活质量量表(EuroQOL)等量表进行评估;同时,在注射细胞前需先留取一定量的CSF离心备用。移植后观察患者是否有副反应及并发症,并记录。(3)A、B两组获得MSCs后再各分出两组,记为A1、A2、B1、B2四组,A1组为BMMSCs+CSF诱导组,A2组为BMMSCs+生长因子诱导组,所用MSCs来自A组NDD患者自身,且A1组所用CSF亦来自A组NDD患者自身(首次移植鞘内注射干细胞前获得);B1组为UCBMSCs+CSF诱导组,B2组为UCBMSCs+生长因子诱导组,所用MSCs均来自足月健康顺产新生儿,而B1组所用CSF来自B组NDD患者(首次移植鞘内注射干细胞前获得)。参照我们的专利及既往相关文献方法,对A1、A2、B1、B2四组,进行诱导,并用倒置显微镜和电镜观察、流式细胞分析、免疫组化和荧光免疫组化分析及反转录聚合酶链反应分析等方法对目的细胞进行鉴定,并记录目的细胞达临床可用数量级(107/ml)时所需的时间及所获得具体细胞计数。(4)将A1、B1两组获得NSCs,取一定量,通过LP-II法对患者进行第二次干细胞移植治疗,注射细胞前亦需先留取一定量的CSF离心备用。移植后亦需观察患者是否有副反应及并发症,并记录。(5)如果患者需要进行多次移植治疗,可循环以上步骤,实现一次LP-II完成"获取诱导剂与实施治疗"两件事;同时亦可将目的细胞冻存以备患者后用。(6)当完成移植治疗后,需在首次治疗后3个月、6个月对患者随访,观察、记录其神经功能的恢复情况(所用量表同治疗前)及移植术后的不良反应,并与前进行比较。结果:(1)共纳入试验对象NDD患者14人,其中骨髓源干细胞治疗组即A组8人(6男2女);脐血源干细胞治疗组即B组6人(6男0女)。两组在性别比例、平均年龄无统计学差异(P0.05)。(2)A、B两组患者获取临床可用数量级所需的时间及所获得MSCs的细胞数无统计学差异(P0.05)。(3)A1、A2、B1、B2四组的MSCs经诱导后均呈现神经干细胞改变,均可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。并表现相应的特征形态结构、表型和生物学特性。而A1组所获得神经干细胞计数最高,平均为2.49±0.39×10^7/ml,且有统计学差异(P0.05):同时,其所需时间相对较短,平均为13.25±2.82天,且有统计学差异(P0.05)。(4)A、B两组患者在移植干细胞的平均次数及平均数量上无统计学差异(P0.05)。(5)移植后可见A、B两组患者的神经功能均得到不同程度的改善;移植前及首次移植后3月、6月A、B两组患者间的日常生活活动能力量表(Barthel Index,BI)及欧洲生活质量评分量表(Europe quality of life scale,EuroQOL)得分比较均无统计学差异(P0.05),但各组组内不同时间点上的BI、EuroQOL得分有统计学差异(P0.05),说明患者接受干细胞移植治疗后BI、EUROQOL的得分有随时间变化的趋势(P0.05),而时间和分组的交互作用没有统计学意义(P0.05),提示时间因素的作用不随分组的不同而不同。(6)移植术后有3例出现过短暂性低热,2例出现在A组,1例出现在B组,对症处理即可控制;随访至今最长者己达2年,这其中无一例患者出现继发性肿瘤等干细胞移植严重并发症;有4例在随访过程中死于其它疾病,1例出现在A组,死于心源性猝死,3例出现在B组,均死于继发性肺部感染。结论:(1)NDD患者的CSF可诱导自体骨髓源和异体脐血源MSCs定向分化为NSCs,所获得的细胞数亦可满足临床需要(与当下较流行的生长因子诱导法比),符合NDD患者的治疗需要。(2)NDD患者自体骨髓源、异体脐血源MSCs及其经CSF诱导获得的NSCs移植治疗NDD安全,未见明显严重治疗副反应及相关并发症出现。(3)骨髓源干细胞和脐血源干细胞移植治疗能促进NDD患者神经功能的恢复,并使NDD患者的日常生活活动能力、生活质量得到改善,但两种来源的干细胞对NDD患者日常生活活动能力、生活质量的改善程度无明显差异,提示当有干细胞治疗需求的患者自身骨髓条件不允许的情况下,亦可尝试脐血源干细胞移植治疗。(4)一次腰穿实现"获取诱导剂与实施治疗"双得的循环型个体化干细胞治疗模式符合NDD患者的干细胞治疗需求,是一种临床将来可以推广的适用、实用的个体化干细胞治疗模式。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 夏桂枝;张国成;陈新民;郭照江;;脑内移植发展的回顾和展望[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2006年09期
2 陈霞;尹晓娟;;Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究[J];中国药业;2010年21期
3 李成仁;蔡文琴;;脊髓损伤的干细胞移植治疗[J];重庆医学;2006年15期
4 叶红星,刘伟国;神经干细胞治疗帕金森病[J];浙江医学;2004年09期
5 徐南飞;;干细胞在神经系统疾病治疗中的应用[J];神经疾病与精神卫生;2007年05期
6 林兴建;张颖冬;;骨髓基质细胞治疗缺血性脑血管病的研究进展[J];临床神经病学杂志;2007年01期
7 路蔚;王新平;张文治;;神经干细胞治疗缺血性脑卒中的研究进展[J];山东医药;2007年33期
8 张世忠;;神经干细胞治疗帕金森病[J];实用医学杂志;2010年16期
9 林森;;“指挥中心”内的干细胞[J];百科知识;2011年03期
10 刘彩霞;胡国华;;神经干细胞在帕金森病治疗中的研究进展[J];中风与神经疾病杂志;2007年02期
11 周瑞凤;;干细胞移植治疗脑梗死的研究进展[J];医学理论与实践;2006年12期
12 袁野;丁继固;;神经干细胞移植治疗帕金森病的研究进展[J];咸宁学院学报(医学版);2011年01期
13 吴清法,王立生,吴祖泽;间充质干细胞的来源及临床应用[J];军事医学科学院院刊;2002年03期
14 钟斌;魏钰书;邵阳;;神经干细胞治疗新生儿缺氧缺血性脑病的探讨[J];中国新生儿科杂志;2006年06期
15 刘鹏霞;张磊;廖文斌;杜伟廷;顾东生;刘蒙;卢士红;韩忠朝;;异基因间充质干细胞输注促进动脉粥样硬化发展[J];中国实验血液学杂志;2009年03期
16 韩冰;付小兵;;间充质干细胞的研究进展与临床应用前景[J];中国修复重建外科杂志;2006年12期
17 黄金棋;林艳娟;;间充质干细胞治疗自身免疫性疾病及其细胞生物治疗的致瘤性[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年45期
18 范文辉,陈康宁;神经干细胞疗法[J];中国临床康复;2001年22期
19 崔丽英;李晓光;;科学理性地进行肌萎缩侧索硬化干细胞治疗研究[J];中华神经科杂志;2006年08期
20 陈涛;田增民;;神经干细胞来源的研究与进展[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年27期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 牛丰南;陈蕾;徐运;;CART体外诱导骨髓间充质干细胞为神经干细胞[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
2 李仲荣;;神经干细胞移植治疗肠神经肌肉疾病的研究进展[A];2007年浙江省儿科学、小儿外科学学术年会论文汇编[C];2007年
3 杨万章;张敏;吴芳;盛佑祥;梁豪文;王占平;赵宁;;神经干细胞移植在瘫痪康复中的应用[A];中华医学会第八次全国物理医学与康复学学术会议论文汇编[C];2006年
4 郭振兴;郑翠玲;陈振萍;董文川;杨仁池;;胚胎骨髓来源的间充质干细胞对人Th17细胞免疫调节作用的研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
5 孙一睿;胡锦;王尔松;奚才华;姚海军;;单层黏附培养技术在哺乳动物神经干细胞体外稳定增殖和多向分化中的应用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
6 郭勇;张西正;李瑞欣;郭春;闫玉仙;孙鹃;;冻存和传代后的脂肪间充质干细胞向心肌样细胞分化[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
7 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
8 田东萍;苏敏;吴贤英;张舸;;硒、B-27在神经干细胞球存活与分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
9 杨华静;徐鹏;张苏明;;低浓度β-淀粉样蛋白对神经干细胞的作用机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
10 文玉军;王登科;孙征;刘海洋;张莲香;秦毅;;成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谢姜;人脐带间充质干细胞诱导转化成神经干细胞及其移植治疗脑出血的研究[D];中国协和医科大学;2010年
2 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年
3 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年
4 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年
5 郑敏;神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
6 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
7 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
8 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年
9 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
10 李巍;神经干细胞的分化调控及BDNF基因修饰后对大鼠脊髓损伤修复的研究[D];第三军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张勇刚;人骨髓间充质干细胞对神经干细胞增殖与分化培养的影响[D];四川大学;2007年
2 马岚;人间充质干细胞向神经细胞诱导过程中表面标记的变化[D];郑州大学;2005年
3 冯年花;人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的实验研究[D];南昌大学;2010年
4 宋精梅;比较新生大鼠脑部不同部位的神经干细胞被诱导分化为少突胶质细胞的差异[D];福建医科大学;2010年
5 王成春;静脉移植人羊膜间充质干细胞在阿尔茨海默病小鼠的体内迁移及治疗机制研究[D];郑州大学;2010年
6 李政;内皮祖细胞调控神经干细胞分化及其机制研究[D];第三军医大学;2010年
7 王念;绞股蓝皂苷对脊髓源神经干细胞体外培养的影响[D];陕西师范大学;2011年
8 刘朋;海藻酸钙/明胶微胶珠的制备及在神经干细胞培养中的应用[D];大连理工大学;2011年
9 郭兵;大鼠羊膜上皮细胞体外向类神经干细胞诱导分化及其移植后对视神经再生的作用[D];第二军医大学;2010年
10 吴珲;神经干细胞玻璃化冻存及其生物学特性的研究[D];大连理工大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王秋月 王琳;空军总医院采用间充质干细胞救治小脑萎缩[N];科技日报;2009年
2 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
3 时仲省 高思敏;移植神经干细胞 瘫痪兔子可爬行[N];大众卫生报;2001年
4 王成应;能克隆的神经干细胞被分离[N];健康报;2004年
5 刘海英;脑癌源于脑下室区的神经干细胞[N];科技日报;2009年
6 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
7 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
8 刘霞;美将成人皮肤细胞变成神经干细胞[N];科技日报;2011年
9 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
10 记者 吴苡婷;为脑损伤患者治疗打开希望之门[N];上海科技报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978