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山茱萸环烯醚萜苷对蛋白磷酸酶抑制剂拟阿尔茨海默病细胞模型的作用

郐学先  李雅莉  张兰  
【摘要】:目的:探讨中药山茱萸有效部位环烯醚萜苷(CIG)对微管相关蛋白tau蛋白过度磷酸化的拮抗作用及其机制。方法:不同浓度(5-40nmol/L)蛋白磷酸酶抑制剂2A(PP2A)冈田酸(OA)与SK-N-SH神经母细胞瘤细胞共孵育,显微镜观察细胞形态变化及MTT法测神经细胞存活率,建立拟阿尔茨海默病模型tau蛋白过度磷酸化细胞模型。不同剂量CIG与SK-N-SH细胞共同孵育24h,加入OA20nmol/L与SK-N-SH细胞共孵育6h后,MTT法测神经细胞存活率,显微镜下观察细胞形态变化,Western blot方法观察磷酸化tau蛋白表达。结果:正常组SK-N-SH细胞铺展良好,不同浓度OA组随剂量增加,细胞变圆,突起断裂。最终确定OA20nmol/L与细胞共孵育6h为模型组。CIG50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml三个剂量组,可见给药组细胞形态较模型组改善,并有浓度依赖性,CIG(200ug/ml)给药组细胞形态基本恢复正常。OA模型组PP2A蛋白表达较对照组明显降低,CIG给药组PP2A蛋白表达明显上升。OA模型组tau蛋白Ser199/202位点、Ser396位点、Thr205位点和Thr212位点的磷酸化水平明显升高。CIG给药组(100ug/ml和200ug/ml)ser199/202位点和Thr205位点磷酸化tau蛋白的表达随药物浓度增加而显著降低,具有明显的药物依赖性。CIG给药组Thr212位点和Ser396位点磷酸化tau蛋白的表达也有降低的趋势。结论:山茱萸环烯醚萜苷能够抑制神经细胞tau蛋白过度磷酸化,其机制可能与提高蛋白磷酸酶PP2A表达,促进tau蛋白去磷酸化修饰有关,对阿尔茨海默病的治疗可能具有潜在应用价值。

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