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High-throughput screening for protein tyrosine kinases inhibitors

【摘要】:正OBJECTIVE To screen potential protein tyrosine kinases(PTKs) inhibitors.A high-throughput screening model based on the enzyme-linked immunosorbent assay method was optimized and established.METHODS PTKs was extracted from rats brain tissue by density-gradient centrifugation.Multiwell plates were precoated with a synthetic random polymer substrate poly-Glu-Tyr (PGT) containing multiple tyrosine residues,and the residues can be phosphorylated by a wide range of PTKs.A ELISA method was established for detecting PTKs activity by finding the suitable concentration of the substrate PGT,the dilution times of PTKs extract and the antibody.Then samples from our chemical library were screened by using modern automated workstation.RESULTS A stable and sensitive high-throughput screening model for screening PTKs inhibitors was established with Z' factor as 0.60.A total of 89 080 samples were screened at a final concentration of 10μg·ml~(-1),of which samples with inhibition greater than 70%were selected for the further rescreening.Finally,six compounds were identified with high inhibitory activity and perfect dose-effect relationship.CONCLUSION We established a high-throughput screening model for PTKs inhibitors,it is stable,sensitive,reproducible,high efficiency and low costs,and is suitable for large-scale screening of protein tyrosine kinases inhibitors.

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