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大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的构建与鉴定

刘峰  肖兴鹏  田玉科  
【摘要】:目的构建大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体,并在细胞水平鉴定其可调控效率。方法将前期构建好的含大鼠PKCγ基因的shRNA干扰序列从质粒pLVTHM酶切和含tet-on可调控序列从质粒pLVPT-tTR-KRAB酶切后连接,连接后的新质粒包装成慢病毒后感染C6细胞,筛选出感染慢病毒的C6细胞经不同浓度的强力霉素诱导后,用免疫印迹技术(Western blot)检测PKCγ基因的蛋白表达水平的改变以评价慢病毒载体的可调控效率。结果测序证实成功构建了大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体,感染C6细胞后经强力霉素诱导可以依递增浓度梯度递降PKCγ蛋白的表达。结论成功构建大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体,且慢病毒载体可被强力霉素诱导而特异高效地抑制PKCγ基因的表达。

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