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肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内表达和基因组整合研究

付洁  董周寰  栾好飞  高新  李灵珍  宋海峰  
【摘要】:目的:研究肝素酶DNA疫苗经电穿孔免疫在小鼠体内的表达与基因组整合。方法:使用肌肉注射联合活体电穿孔技术将表达肝素酶基因的裸质粒DNA疫苗导入小鼠。免疫后不同时间点取各主要脏器提取组织总RNA。实时荧光定量PCR技术考察肝素酶在各组织的表达及生物分布。对持续高表达和高分布的组织,凝胶电泳法考察质粒DNA疫苗与基因组整合情况。结果:小鼠肌肉注射联合电穿孔导入人肝素酶质粒瞬时(24小时)和长期(5,8周)表现出不同特点。免疫后瞬时主要脏器均能检测到质粒的表达和分布,5周和8周仅能在注射部位发现微量目的mRNA,其它器官均无表达;DNA质粒在所有组织未有分布。未发现基因组整合情况。结论:肌注联合电穿孔可作为有效手段向宿主动物体内导入目的基因,在研究涉及剂量下目的基因可在体内各组织有效分布并表达,未有基因组整合现象发生。

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