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Bmal1基因在肿瘤中的生物作用的阶段性研究

曾昭蕾  吴明玮  冼励坚  
【摘要】:生物节律是指在漫长的生物进化过程中,为了适应自然界周而复始的周期变化,生物体从单细胞到高等动植物以及人类的所有生命活动均形成按照一定规律运行的、周期性的生命活动现象。目前调节生物节律的基因已在果蝇、小鼠、大鼠、人类等多种种属中被克隆。Bmal1基因是一种重要的生物钟基因,它参与调控机体的生物节律,与肿瘤的发生发展有着密切的联系。目的:本课题拟通过构建慢病毒载体,利用RNA干扰技术,研究Bmal1基因在体内外对小鼠结肠癌细胞C26增殖、基因调控的等方面的影响,从而探讨Bmal1基因在肿瘤发展中的生物作用。方法:构建干扰Bmal1基因表达的慢病毒载体;运用MTT法测定C26细胞的生长曲线;应用rt-PCR法测定时钟基因以及肿瘤相关基因的表达情况;应用western blot法测定蛋白表达情况。结果:在小鼠结肠癌细胞中Bmal1的表达较小鼠正常细胞明显下降。沉默Bmal1的细胞生长速率较对照细胞明显加快,细胞培养96小时后,沉默Bmal1的细胞较对照组生长增加约20%。沉默Bmal1基因后,时钟基因per2、per3的基因表达水平明显下调,rev-erbα等基因表达上调;细胞周期调控基因wee1的基因表达明显下调;p21、p53等抑癌基因表达下调。结论:Bmal1基因可能作为一个抑癌基因影响着肿瘤的发生发展,并值得进一步深入探讨。

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